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1、神经营养素受体p75NTR在不同胎龄人胎脑海马中的表达论文王伴青，胡煜辉，廖义林，彭建安，温永顺【关键词】神经营养素受体；海马；人胎脑【关键词】神经营养素受体；海马；人胎脑0引言神经营养素是一个高度保守的生长因子家族,包括两种受体:低亲和力的神经营养素受体p75(p75neurotrophinreceptor,p75NTR)和高亲和力的Trk.p75NTR是一种Mr为75000的I型膜蛋白，属于肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRⅠ）的成员.在不同的条件下p75NTR发挥完全不同的生物学效应，一方面它与Trk共表达时，二者结合成杂合二聚体.freelAb为美国SantaCr
2、uz公司产品，ＳＰ免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购于北京中山生物试剂公司.1.2方法1.2.1取材、固定及切片水囊引产胎儿娩出后(均已死亡)2～3h内开胸经左心室先以生理盐水灌注冲洗干净后,再以40g/L多聚甲醛液/0.1mol磷酸缓冲液灌注固定4h,打开头皮及颅骨,撕除脑表面之被膜,切取海马组织,相同固定液后固定1L/L上行梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋,连续切片，切片厚度为8μｍ,贴于涂有多聚赖氨酸胶的清洁玻璃片上烤干待用.1.2.2免疫组化染色(ＳＰ法)采用mAb链菌素亲生物蛋白过氧化物酶(ＳＰ)免疫组化法.石蜡切片经常规脱蜡后,清水冲洗，滴加30g/L过
3、氧化酶阻断剂50μL,.freelin,清水冲洗;0.01mol/LＰＢS洗5min×3次;加10g/L正常山羊血清50μL,室温下孵育30min,吸去多余液体;5组分别滴加鼠抗人p75mAb（1∶100）（SantaCruz,USA）50μL,4℃的冰箱过夜,0.01mol/LＰＢS洗5min×3次；加生物素标记二抗（1∶200）50μL,室温下1h，0.01mol/LＰＢS洗5min×3次；加ＳＰ溶液50μL,室温下1h，0.01mol/LＰＢS洗5min×3次;加DAB液100μL,显色5min后双蒸水冲洗中止反应,脱水、透明、中性树脂封片,光镜下观察.用0.01
4、mol/LＰＢS代替一抗作对照实验，结果为阴性.1.2.3图像分析每组每例取3张切片，每张切片在光镜(×400)下阳性细胞分布均匀的部位随机各取5～10个视野,图像经摄像仪输入电子计算机,经HMIAS2000高清晰度彩色医学图文分析系统细胞测量程序处理,计算出每组阳性细胞数和总细胞数，再计算出每组样本的阳性细胞百分率.统计学处理:采用SPSS10.0统计软件中R×C表资料的χ2检验比较组间p75NTR阳性细胞百分率，P0.05认为有统计学意义.2结果2.1p75NTR的表达与分布在光学显微镜下观察p75NTR免疫反应阳性产物为棕黄色颗粒，主要定位于细胞质内，部分胞核淡染
5、.在不同胎龄的切片均可见p75NTR免疫反应阳性细胞.由于在16odel［J］.JBiolChem,2001,276(36):33812.［2］YamashitaT,FujitaniM,HataK,etal.Diversefunctionsofthep75neurotrophinreceptor［J］.AnatSciInt,2005,80(1):37-41.［3］PattenBM.Humanembryology［M］//2nd.Neentoftheratretina［J］.DevNeurosci,2001,23(6):390-398.［5］LachyankarMB,Co
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