人类ermap基因在不同胎龄胎儿组织中表达的研究论文

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1、人类ERMAP基因在不同胎龄胎儿组织中表达的研究论文何新荣，何映谊，陈滢，叶铁真【摘要】人类ERMAP基因是新近发现的编码红细胞膜相关蛋白基因，其功能可能与红系造血活动有关。为探讨该基因在胎儿造血过程中的作用，收集9-36周难免流产胎儿共29例，分别抽提其肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺脏、胸腺、大脑、骨髓和肌肉等9种脏器组织的RNA，取其中胎龄25+5周（25周过5天.freelanERMAPGeneinFetalTissuesAbstractHumanERMAP(hERMAP)isanovelgenecodingforerythroidmembrane-associatedprotein,

2、ayplayaroleinerythropoiesis.ToexploretheroleofhERMAPinfetalhematopoiesis,29fetusesofinevitableabortiontheliver,spleen,kidney,heart,lung,thymus,brain,bonemarrouscle,theRNAsfromarro12th-21st-arro15th33rdespecimensofkidney,heart,lung,thymus,brainandskeletalmuscle.ItisconcludedthattheexpressionofhERM

3、APinfetalliverapproximatelyconsistentatopoiesisoffetalliver,andtheexpressionofthisgeneinbonemarroatopoiesisoffetalbonemarroigrationoferythroidcellstoliverandbonemarroentprocess.KeyanERMAP；fetalstage；haematopoiesis近年来，Ye等［1-3］分别从鼠胚胎红细胞和人胎肝cDNA文库中筛选出编码红细胞膜相关蛋白（erythroidmembrane-associatedprotein，ER

4、MAP）基因，并证实其高度特异表达于胎肝、成人骨髓等造血组织以及K562和HEL细胞系，其编码的蛋白分子定位于网织红细胞和原始红细胞膜、293T细胞膜和其他胞浆小体上，分析显示其为一跨膜蛋白分子，属免疫球蛋白超家族成员。推测ERMAP可能通过细胞间的黏附和（或）识别，影响红系造血，或在红系相关性疾病、自身免疫性疾病和其他疾病中起一定作用。目前关于该基因的特性与功能尚待进一步研究。本研究旨在通过观察人类ERMAP基因在不同胎龄胎儿各脏器组织中的表达谱及表达量的变化，探讨该基因在胎儿造血过程中的作用。材料和方法材料收集2004年3月至2004年11月由广东省妇幼保健院、广州医学院第二附属医院

5、、东山区妇幼保健院、海珠区妇幼保健院等医院妇产科提供的难免流产胎儿，胎龄不限。均排除胎儿先天畸形、孕母遗传性疾病、妊娠期间用药史。胎儿离开母体后立即取肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺脏、胸腺、大脑、骨髓和肌肉9种脏器组织，放入冻存管，置于-80℃冰箱保存。方法总RNA的提取称取50-100mg组织置于研钵中，加入液氮研磨成粉末状，转移至含1mlRNA-solv的离心管中，按照RNA-sol试剂（Omega公司产品）说明书提取RNA，置于-80℃保存。用紫外透射灯(Amersham公司产品)分析其纯度，要求OD260/OD280值在1.8-2.0。提取物经1%琼脂糖凝胶电泳证实为完整RNA。ER

6、MAP基因表达谱的Northernblot观察选取1个胎龄为25+5周(25周过5天）的胎儿，将上述9种脏器组织的总RNA在1%琼脂糖凝胶上甲醛变性电泳3小时（5V/cm），在紫外分光光度仪下测量18S、28S条带到点样孔的距离，利用真空转移仪转膜2小时。然后以PCR方法分别标记ERMAP和β-actin探针（按照PCRDIGProbeSynthesisKit试剂盒说明书操作，引物由北京赛白盛有限公司合成），ERMAP引物序列为5′-GAGATGGCGAGTTCTGCT-3′，5′-CACCGTCCTCCCCTTATA-3′，β-actin引物序列为5′-CATCTCTTGCTCGAAG

7、TCCA-3′，5′-ATCATGTTTGAGACCTTCAACA-3′。对照管加入无DIG标记的dNTPs。探针变性后进行预杂交及杂交，经过低严谨性和高严谨性洗膜后，加入Anti-Digoxigenin-AP孵育30分钟，再加入CDP-Star显色剂于尼龙膜上，将膜曝露在化学发光成像仪（美国System-genome公司产品）中检测荧光信号。ERMAP基因表达量的FQ-PCR检测［5］取各脏器组织的总RNA逆转录制备cDNA（反应