高效液相色谱法测定龙血竭丸中龙血素b的含量论文

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1、高效液相色谱法测定龙血竭丸中龙血素B的含量论文蒋林，吴玉强，杨兴，黎明，农毅清【摘要】目的用高效液相色谱（HPLC）法测定龙血竭丸中龙血素B的含量，建立含量测定方法。方法冰醋酸溶液（1→90）-乙腈（61∶39）为流动相,流速为1ml/min，柱温为室温，检测波长260nm。结果龙血素B浓度在14～84μg/ml范围内呈良好的线性关系.freelethodfordeterminationofLoureirinBinDragonbloodpills.MethodsThemobilephasel/min.Thed

2、etection.ResultsThestandardcurveofLoureirinBl,r=0.9999.TheaveragerecoveryethodissimpleandreliablefordeterminationofLoureirinB.ThecontentofLoureirinBindragonbloodpillsofdifferentbrandsallmatchesthenationalstandard.Keyasil100-5C18（5μm,4.6mm×250mm）；流动相为冰醋酸溶液（1

3、→90）乙腈（61∶39）；检测波长为260nm，柱温为室温，流速为1.0ml/min;进样量10μl［2］。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取龙血素B对照品1.52mg，置于25ml容量瓶中，加冰醋酸溶液（1→90）乙腈（61∶39）溶解，并稀释至刻度，摇匀，得浓度为60.8μg/ml的对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取龙血竭丸20粒，研成细粉，取0.25g，精密称定，置于25容量瓶中，加冰醋酸溶液（1→90）乙腈（61∶39）22ml，超声处理15min，放冷，加冰醋酸溶液（1

4、→90）乙腈（61∶39）至刻度，摇匀，用0.45μm的滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。2.3标准曲线精密称取龙血素B对照品3.50mg，置于25ml容量瓶中，加冰醋酸溶液（1→90）乙腈（61∶39）溶解，并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1，2，3，4，5，6ml到10ml容量瓶，加冰醋酸溶液（1→90）乙腈（61∶39）配成浓度为：14.0，28.0，42.0，56.0，70.0，84.0μg/ml的标准液，按上述色谱条件分别进样10μl，测定峰面积。以龙血素B的浓度（μg/ml）为

5、横坐标,峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=24515.622X+145.667，R=0.9999。龙血素B浓度在14～84μg/ml范围内呈良好的线性关系。2.4精密度实验取对照品溶液在上述色谱条件下重复进样5次，10μl/次,测定峰面积,结果RSD为1.15%（n=5）。2.5稳定性实验取同一样品溶液分别于0，2，4，8，12，24h进样测定峰面积,结果RSD为1.36%（n=6）,表明样品在24h内稳定。2.6重复性实验取同一批号的龙血竭丸6份，按正文含量测定方法平行实验,测定其平均含量为4.7

6、9mg/g，RSD为1.81%。2.7加样回收率实验精密称取已知含量的同一批样品(含量为4.79mg/g)约0.125g,分别精密加入龙血素B对照品适量,.freelg/g。3讨论龙血素B(4-羟基-2,4,6-三甲氧基二氢查耳酮)是龙血竭中的主要有效成分,现有的文献报道中大多测定的是药材中龙血素B的含量［3］，而制剂相关的文献较少。用HPLC法测定龙血素B的含量，方法稳定，结果准确，可作为本制剂的质量控制方法。3.1流动相选择根据报道，比较了乙腈-水系统［4］、甲醇-1%冰醋酸系统、甲醇-0.1%磷酸系统、

7、乙腈-0.1%磷酸系统，效果均不如乙腈-冰醋酸溶液（1→90）系统理想。3.2色谱柱选择在实验中，比较了HanbonLichrosphenC18（5μm,4.6mm×250mm）、AgilentZORBAXSB-C18（5μm,4.6mm×250mm）和Kromasil100-5C18（5μm,4.6mm×250mm），分离度均大于1.40，理论塔板数均大于16000，满足实验要求，但Kromasil100-5C18柱分离效果最好，故本实验采用Kromasil100-5C18柱。【