龙血竭中龙血素a与龙血素b在大鼠体内的组织分布研究

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1、龙血竭中龙血素A与龙血素B在大鼠体内的组织分布研究孙晓博，金描真，李雪，金鸽【关键词】龙血竭；龙血素A；龙血素B；高效液相色谱法；组织分布　　Abstract:ObjectiveTostudythetissuedistributionofloureirinAandloureirinBinrats.MethodsAfterintragastric(i.g.)administrationofloureirinAandloureirinBatdosesof250mg/100ginrats,thetissu

2、econcentrationsatdifferenttimepointsinedbyHPLC．ResultsAfteri.g.administration,themaintissuedistributionsofloureirinAandloureirinBinratsilar.TheloureirinAandloureirinBconcentrationsintheliverandkidneyuscledecreasedsequentially．ConclusionThere，250mm×4．6m

3、m)；保护柱：EasyguardC18ReplacementCartridgesCat#6101；流动相：乙腈1％冰醋酸(体积比35∶65)；检测波长：280nm；流速：1.2mL／min，柱温30℃。　　1.4龙血素A、龙血素B对照品贮备液的制备　　　　取龙血素A用甲醇配制成每1mL含100μg的溶液，作为对照品储备液。龙血素B用甲醇配制成每1mL含80μg的溶液，作为对照品储备液。　　1.5样品的制备与测定　　　　取大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑，用水洗净，滤纸吸干，称重，加生理盐水制成30%的组

4、织匀浆液，-20℃保存，备用。　　　　取组织匀浆液1mL，加入乙腈2mL，乙酸乙酯2mL〔4〕，涡旋振荡1min，3000r/min离心10min，取上清液，再重复提取2次，合并上清液，50℃水浴挥干，于残渣中加入100μL甲醇,溶解，10000r/min离心10min，取上清液20μL进样。　　2结果　　2.1标准曲线和线性范围　　　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液，配成系列标准溶液，混匀，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2mL，乙酸乙酯2mL”起，依法操作。记录峰

5、面积。以质量浓度（ρ)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线，结果表明，龙血素A、龙血素B的质量浓度与峰面积呈良好线性关系，龙血素A和龙血素B的检测限为0.025μg/mL和0.023μg/mL，各组织回归方程见表1、表2。表1各组织中龙血素A的标准曲线、相关系数及线性范围（略）表2各组织中龙血素B的标准曲线、相关系数及线性范围（略）　　2.2回收率试验　　　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液，混匀，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2mL，乙酸乙酯2m

6、L”起，依法操作。计算绝对回收率，结果见表3、表4。表3各组织中龙血素A的回收率试验（略）表4各组织中龙血素B的回收率试验（略）　　2.3精密度试验　　　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液（加入量与回收率项下加入量相同），混匀。按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2mL，乙酸乙酯2mL”起，依法操作。计算日内、日间精密度，各组织中龙血素A和龙血素B的日内及日间RSD均小于10%。　　2.4稳定性试验　　　　取各组织空白匀浆液，精密加入龙血素A、龙血素B对照品储备液（加入量与

7、回收率项下加入量相同），混匀。放置-20℃保存1周，37℃水浴解冻后，按“1.5”项下的方法，自“加入乙腈2mL，乙酸乙酯2mL”起，依法操作。冻融样品稳定。　　2.5方法专属性　　　　取2只大鼠，实验前禁食12h，自由饮水，1只做空白对照，1只按100g给予龙血竭250mg，灌胃给药，给药2h后处死，按“1.5”项下的方法，依法操作。由图1可见组织中的内源性物质不干扰龙血素A和龙血素B的测定。其他组织的HPLC图中龙血素A和龙血素B的出峰时间与肝脏的HPLC图相同。　　2.5组织分布　　取大鼠36

8、只（实验前禁食12h，自由饮水）随机分成6组，每个时间点6只，称重，按100g大鼠给予龙血竭250mg，灌胃给药，分别于1、2、3、4、6、10h处死大鼠，按“1.5”项下的方法，依法操作。结果表明，龙血素A、B在肝脏及肾脏浓度最高，然后依次是肺、脾、心、骨骼肌、脑,见图2、图3。　　3讨论　　　　药物的组织分布与药物本身的理化性质，药物与组织的亲和力及各组织器官的血流量等有密切的关系，因而在组织中的分布不相同。大鼠口服龙血竭后，经血液循环而不同程度地分布于心、肝、脾