反相高效液相色谱法测定水红花子中槲皮素的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定水红花子中槲皮素的含量论文向梅先，苏汉文，闫云君【摘要】目的建立水红花子含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法测定水红花子中的含量槲皮素，以C18柱为色谱柱，甲醇-0.4％磷酸溶液（42∶58）为流动相；检测波长为375nm。按外标法进行检测。结果线性范围0.12～1.2μg（r=0.9999），平均回收率99.1％，RSD＝3.1%。结论此方法简便，准确。【关键词】高效液相色谱法；水红花子；槲皮素Abstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofquercetinfromthefruitsofP

2、olygonumorientaleL.MethodsQuercetininedbyHPLC.Themobilephase.Theexternalstandardmethodplesizeshopleethodissimple,accurate.KeyorientaleL.；Quercetin水红花子为红蓼的成熟果实，具有散血消癥、消积止痛之功。用于癥瘕痞块，瘿瘤肿痛，食积不消，胃脘胀痛等症。在前人对水红花子有关现代药理研究的基础上，本文对水红花子［1］的含量进行了相关研究，以期探讨该药材的指纹图谱研究，为该药材制定质量标准奠定基础。1材料Agilent1100高效液相色谱系统［美国

3、Agilent公司］,CIV-240IPC紫外分光光度计（日本SHIMADZU公司）；槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所）；水红花子购于湖北省中药材公司,药材经中南民族大学万定荣教授鉴定为蓼科植物红蓼的成熟果实即水红花子。所用试剂均为分析纯，水为注射用水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为KromasilC18250mm×4.6mm；柱温30℃；流动相为甲醇-0.4％磷酸溶液（42∶58）；流速1.0ml·min-1；检测波长375nm；进样量10μl。色谱图见图1。2.2对照品溶液的制备精密称定槲皮素对照品适量，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成含槲皮素0.6mg·

4、ml-1的对照品溶液。2.3供试品溶液的制备取水红花子粉末约5.0g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)80ml，加热回流1h，滤过，弃去石油醚液，药渣加甲醇80ml，加热回流提取至无色，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移置10ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。2.4线性关系考察取配制含槲皮素0.06mg·ml-1的对照品溶液，分别进样2，4,6，8，10，20μl测定槲皮素的吸收峰峰面积，以进样量(μg)为横坐标，吸收峰峰面积为纵坐标作图，得出回归方程为：Y=18.772X-4.7517,r=0.9999。结果表明

5、,槲皮素进样量在0.12～1.2μg范围内呈良好的线性关系。2.5精密度实验取对上述照品溶液10μl，重复进样5次，按上述色谱条件进行测定，其相对保留时间稳定，RSD为0.9％（n=5），表明仪器精密度良好。2.6稳定性实验取同一浓度的供试品溶液，分别进样10μl于0，6，12，24，48h进样测定，RSD为2.7％（n=5），表明样品溶液在48h内基本稳定。2.7重复性实验取同一批号药材，按供试品溶液的制备方法平行制备5份，按上述色谱条件进行测定，RSD为2.5％（n=5）,表明该方法重复性良好。2.8回收率实验精密称取5份已知含量的水红花子粉末，分别准确加入适量槲皮素对照品，按

6、供试品溶液的制备方法处理并进行测定，结果平均回收率为99.1％，RSD＝3.1%（n=5）。表明该测定方法可靠。结果见表1。表1回收率实验（略）2.9样品含量测定按上述方法对3批水红花子粉末，按前面含量测定方法进行测定，计算样品中槲皮素的含量，分别为0.0256%，0.0235%，0.0224%。3讨论为更有效控制本品的内在质量，本文采用了RP-HPLC法测定其槲皮素的含量，其方法简便，分离度好，专属性强，为水红花子指纹图谱研究奠定了基础。实验曾分别选用甲醇-0.5％醋酸溶液和甲醇-0.4％磷酸溶液为流动相［2，3］进行测定，结果流动相中加入一定量的磷酸，可改善峰形和分离度。【