灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑内fas表达的抑制作用论文

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1、灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑内Fas表达的抑制作用论文【摘要】目的研究灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用，探讨其作用机制。方法选用40只雄性gSO4治疗组、灯盏花素治疗组Ⅰ和Ⅱ（BreⅠ、Ⅱ组）。结扎中脑动脉，然后再灌注。用TUNEL法和免疫组化法分别检测脑组织凋亡细胞和Fas阳性细胞的变化。结果①降低脑组织凋亡细胞：MgSO4组、BreⅠ、Ⅱ组在脑缺血再灌注23h后海马区凋亡神经元/海马神经元均较IR组海马区凋亡神经元/海马神经元低，差异有显著性。②降低Fas阳性表达细胞数量：MgSO4组、BreⅠ组和BreⅡ组在脑缺血再灌注23h后海马区Fas表达阳性神经元/海马神

2、经元均较IR组海马区Fas表达阳性神经元/海马神经元低，差异有显著性。结论灯盏花素可显著保护大脑缺血再灌注引起的脑损伤,可能与其抑制Fas蛋白的表达有关。其作用优于单用MgSO4。【关键词】灯盏花素；脑缺血；再灌注；凋亡细胞；Fas蛋白Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectandmechanismofbreviscapineonratcerebraldamageafterischemiareperfusion.Methods40malegSO4treatmentgroup,breviscapinetreatmentgroupⅠand

3、Ⅱ.Thebrainarteryethodandimmunohistochemicalmethodrespectively.Results①Apoptosisofneuronscellsinbrainpusapoptosisneurons/hippocampalneurons23hrsafterischemiareperfusion,andBregroupberofFaspositivecellsincerebralpusFaspositiveneurons/hippocampalneurons23hrsafterischemiareperfusion,andBregroupis

4、chemiareperfusionbraininjury,.freelightberelatedtoinhibitionofFasproteinexpression.Itseffectia;reperfusion;apoptosiscells;Fasprotein脑血管缺血性疾病是高致残率和高死亡率的疾病，神经保护药物将有助于减轻缺血半暗区的损伤，促进脑功能的恢复。灯盏花素(breviscapine.freeliareperfusion，IR)有保护作用［4,5］，然而，其治疗机制尚不完全清楚。本文进一步研究灯盏花素(Bre)对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用及其可能机制，观察

5、其保护作用是否比MgSO4更有效。1材料与方法1.1材料40只gSO4(无锡第七制药厂)，用母液治疗，传统常用药物；HistostainTMSPKits和抗Fas蛋白抗体为美国SantaCruz生物技术产品。1.2方法1.2.1动物分组40只gSO4组（30mg/kg）。所有药物在缺血10min后静脉给药。实验过程中无死亡和脱失。1.2.2中脑动脉结扎(MCAO)方法见文献［6］。1.2.3原位末端标记（TUNEL）染色用TUNEL方法检测凋亡细胞的DNA片段。在荧光显微镜下计数凋亡细胞,观察缺血再灌注2h，5h,23h脑组织凋亡细胞的变化。1.2.4免疫化学染色免疫组织化学抗Fas

6、蛋白染色及Fas蛋白阳性细胞表达的观察与半定量测定。快速取一部分缺血大脑海马组织，常规经甲醛固定、脱水、包埋、切片(5μm)，免疫组织化学染色采用链霉素亲生物素－过氧化物酶法(SP法)。经梯度脱蜡、抗原修复(胰酶消化)、漂洗、小牛血清封闭非特异抗原、加一抗、漂洗、加二抗、漂洗、3，3’二氨基联苯胺染色，苏木素染色、脱水、透明、封片等步骤，在光镜下观察，并进行半定量图像分析。20倍物镜下在每张切片梗死灶周边区域即缺血半暗带区取相互不重叠的6个视野，记取其中Fas蛋白表达阳性细胞，每只大鼠所有切片上阳性细胞密度(以阳性细胞数/10×20视野表示)的（±s）作为该只动物缺血半暗带区阳性细

7、胞密度代表值，并显微照相。1.2.5统计学处理采用统计学软件包SPSS11.5进行统计分析。实验数据用平均数±标准差(±s)表示，用StudentNeanKeul检验后再进行方差分析，以P0.05为差异有显著性。2结果2.1Bre对神经元凋亡的影响在缺血再灌注后3个不同的时间点，与IR组比较，Bre组和MgSO4组大鼠海马的平均凋亡细胞明显降低。Bre组大鼠海马平均凋亡细胞比IR组和MgSO4组显著地减少，差异有显著性。见表1。表1脑缺