丹蛭降糖胶囊提取工艺的优选论文

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　　丹蛭降糖胶囊提取工艺的优选论文.freelizationofExtractingProcessofDanzhiJiangtangCapsuleJIANGLei1,2,,Hefei230031,China；2.TheFirstAffiliatedHospitalofAnhuiCollegeofTCM,.freelinistrationofTCM,Hefei230031,China)Abstract：ObjectiveTooptimizetheextractingconditionforDanzhiJiangtangCapsule.Methodsixitsgruffsandothermedicinalsubstances,orthogonaldesignontofpolycoseandthecontentofpaeoniflorinasthestandardstostudytheextractingfrequency,timesandamountofizedextractingconditiones.ConclusionTheoptimizedprocessisconvenientandstable.Key 32工作站)；Agilent-8453紫外分光光度计；电子天平(友声衡器有限公司)；医用离心机(上海手术器械厂)；水浴锅；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；真空干燥箱(巩义市英峪予华仪器厂)。无水葡萄糖对照品(中国医药集团上海化学试剂公司,批号20090514)；芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110736-200934)。浓硫酸；苯酚；甲醇为色谱纯；水为双蒸水。2方法与结果2.1干膏得率的计算将正交试验所得各组提取液均浓缩至500mL,分别取100mL至蒸发皿中,100℃水浴蒸干,于80℃常压干燥至恒重,移至干燥器中冷却30min,迅速称重,计算干膏得率。干膏得率(%)＝干膏重量/原药材的重量×100%。2.2干膏中总多糖的含量测定32.2.1标准曲线的制备称取经105℃烘干至恒重的葡萄糖对照品75mg,用蒸馏水定容至250mL,得对照品溶液。分别取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL,置50mL容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。分别取上述溶液2.0mL于15mL具塞试管中,各试管分别加1.0mL5%苯酚溶液,混匀,迅速滴加5.0mL浓硫酸,振摇5min,置沸水浴中加热15min,放冷水中冷却。另取2.0mL蒸馏水同上法制成空白对照溶液,于490nm处测定其吸光度值。以吸光度(A)对葡萄糖浓度(C)作线性回归,得回归方程为A＝12.242C＋0.1444,r＝0.9991,表明葡萄糖标准溶液在0.006～0.036mg/mL范围内线性关系良好。2.2.2样品溶液的制备各取样品0.5g,用蒸馏水定容至50mL,沸水浴30min,趁热用脱脂棉过滤,待冷却后取1mL,加无水乙醇至10 mL,搅拌,离心,弃上清液,沉淀用无水乙醇洗涤至无色,挥干乙醇,沉淀用蒸馏水定容至100mL,得样品溶液,进行含量测定。多糖含量(mg/g)＝A样品/A对照品×葡萄糖对照品浓度×稀释倍数。2.3干膏中芍药苷含量的测定42.3.1色谱条件色谱柱为KromasilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相：甲醇-水(35∶65),流速0.9mL/min,检测波长为230nm。2.3.2标准曲线的制备精密称取芍药苷标准品0.47mg,用甲醇定容至5mL,精密量取芍药苷对照品4、8、12、16、20μL进样,测定峰面积。以峰面积积分值(A)对浓度(C)进行回归分析,得回归方程为：A＝822796C－59211,r＝0.9998,表明芍药苷对照品在0.376～1.88mg/mL范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。2.3.3样品溶液的制备称取各组干浸膏0.1g,用甲醇定容至10mL,称定重量,超声30min,放冷,补足甲醇减失的重量,过滤,进行含量测定。芍药苷含量(mg/g)＝样品峰面积/对照品峰面积×对照品浓度×稀释倍数。2.4正交试验2.4.1试验设计先将牡丹皮加20倍水,浸泡,进行直接水蒸气蒸馏,收集馏分至不再浑浊,冷藏24 h,抽滤得丹皮酚晶体,滤液再加适量5%NaCl重蒸馏,收集浑浊滤液,冷藏,抽滤,得丹皮酚晶体。药渣与其他药味混合进行提取条件的优化。以提取次数、提取时间、加水量为考察因素,每个因素在预试验的基础上设3个水平,选用L9(34)正交表安排实验,优选提取工艺。见表1。表1提取因素水平表水平提取次数(次)提取时间(h)加水量(倍)ABC111.08221.510332.0122.4.2结果与分析结果分析表明,以芍药苷含量为考察指标,提取次数(A)、提取时间(B)、加水量(C)对其无显著影响,从直观分析可以看出,3个因素的影响主次是A＞C＞B。以出膏率为指标时,直观分析显示各因素作用主次为A＞C＞B,其中A3＞A2＞A1,B2＞B3＞B1,C2＞C3＞C1,方差分析显示,A因素对结果有显著影响,B、C因素无显著影响,可确定最佳提取工艺为A3B2C2。以多糖为指标时,直观分析表明,各因素作用主次也为A＞C＞B,其中A3＞A2＞A1,B3＞B2＞B1,C2＞C3＞C1,但B2与B3非常接近,从节约资源和试验方便性角度考虑可选用B2,即提取1.5h即可,所以,最佳提取工艺也为A3B2C2,与以出膏率为指标优选的条件相符。正交试验结果见表2,方差分析见表3～表5。表2正交试验结果试验号ABC出膏率 (%)多糖量(g)芍药苷含量(mg/g)111121.172.222.11212226.582.642.56313328.153.312.56421232.225.462.62续表2试验号ABC出膏率(%)多糖量(g)芍药苷含量(mg/g)522332.894.672.44623128.603.552.60731335.816.372.67832138.477.322.61933239.418.002.35浸膏K125.30029.73329.413K231.23732.64732.737K337.89732.05332.283R12.5972.9143.324 多糖K12.7234.4834.363K24.5604.8774.187K37.2304.9535.363R4.5070.2701.004芍药苷K12.4102.4672.440K22.5532.5372.510K32.5432.5032.557R0.1430.0700.117表3出膏率统计结果误差来源离差平方和自由度方差F值显著性A238.2762119.13822.198P＜0.05B14.22227.1111.325C19.48729.7441.815D10.73025.365表4多糖量统计结果误差来源离差平方和自由度方差F值显著性A30.821215.406265.612P＜0.01B0.11620.0581.000C1.52320.761513.129 D1.12020.06表5芍药苷含量统计结果误差来源离差平方和自由度方差F值显著性A0.03820.01905.429B0.00720.00351.000C0.02120.01053.000D0.01020.0050注：FO.05(2.2)＝19,FO.01(2.2)＝992.5验证试验为进一步考察优选工艺的稳定性,按照优选出的最佳工艺进行3次验证试验,结果表明优选的条件可靠、稳定(见表6)。表6验证试验结果试验号出膏率(%)多糖量(g)芍药苷含量(mg/g)芍药苷转移率(%)138.347.9662.5563.17238.187.8482.5463.15338.327.8882.5763.833讨论原制剂工艺中将牡丹皮与其他药味一同煎煮,丹皮酚损失量大,利用高效液相色谱测定对制剂中丹皮酚的含量进行测定, 发现其含量极低,且利用薄层鉴别几乎鉴别不出。本试验将牡丹皮单独提取,提取率最高可达90%,减少了方中有效成分的流失,制剂质量得以提高。药理研究表明,丹皮酚药理活性广泛,主要用于心脑血管、肿瘤、炎症、变态反应及免疫系统疾病5。研究发现,丹皮酚可以通过降低糖尿病大鼠血中的内皮素、血栓素B2、C反应蛋白、细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子-1含量,升高6-酮-前列腺素F1α的含量,达到保护糖尿病大鼠血管内皮细胞的作用6。本试验采用苯酚-硫酸显色法,以葡萄糖计算测定复方中药提取液中总多糖的含量。由于多糖不溶于乙醇,故采用乙醇沉淀提取多糖,经预试验考察,采用无水乙醇进行沉淀效果最佳,所以,本试验采取在1mL样品溶液中加无水乙醇至10mL的方法进行处理。另外,硫酸加入的量和水浴时间也需严格控制,硫酸加入后要充分混匀,100℃水浴30min。在正交设计选用芍药苷为指标时,提取的次数、时间、加水量对其均无显著影响,原因可能是芍药苷水提取较易提出,且芍药苷也是牡丹皮的主要成分之一,将牡丹皮单提时已将芍药苷提出一部分,正交试验设定的因素水平已达到了其提取的最大提取率。但对芍药苷含量的直观分析可以看出,3个因素的影响主次是A＞C＞B,和对出膏率、多糖量的直观分析一致。本研究确定了丹蛭降糖胶囊提取的最佳工艺,优选后的最佳工艺条件为A3B2C2,即加10倍量水提取3次,每次1.5 h。通过验证试验证明其最佳工艺稳定、可靠。【