高效液相色谱法测定空心莲子草中穆坪马兜铃酰胺的含量论文

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1、高效液相色谱法测定空心莲子草中穆坪马兜铃酰胺的含量论文师磊朱红马卓刘焱文【摘要】目的建立空心莲子草中穆坪马兜铃酰胺的含量测定方法。方法采用HPLC法定量分析空心莲子草中穆坪马兜铃酰胺的含量，色谱柱为AlltimaC18（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈－水（25∶75）为流动相，检测波长220nm，流速1.0ml·min-1，柱温30℃。结果穆坪马兜铃酰胺进样量在0.0541～1.0802μg范围内线性关系良好，线性回归方程为Y=6965.4X－2148.5.freelinationmethodofthecontentofN

2、-trans-feruloyltyramineinAlternantheraphiloxerodes.MethodsThecontentofN-trans-feruloyltyramineinAlternantheraphiloxerodesinedbyHPLCandAlltimaC18column(250mm×4.6mm，5μm)obilephaseixtureofacetonitrile-ntemperaturel·min-1andthedetection.ResultsThecalibrationcurveofN-trans-

3、feruloyltyramineethedissimpleandtheresultisaccurate.Keyine；HPLC空心莲子草Alternantheraphiloxerodes（Mart.）Griseb为苋科莲子草属（Alternanthera）多年生宿根草本植物，又名空心苋、螃蜞菊、水花生等［1］。曾收载于《中国药典》Ⅰ部（1997年版），具有清热解毒、凉血利尿的功效。现代药理研究表明，空心莲子草具有抗流感病毒［2］、抗流行性出血性热病毒［3］、抗乙型肝炎病毒等［4］多种抗病毒药理作用。本实验室从空心莲子草中提取分离得到

4、的生物碱类成分穆坪马兜铃酰胺具有明显的抗乙肝病毒药理活性(药理研究由武汉大学生命科学院病毒学教育部重点实验室协助完成),故对其进行含量分析研究,对今后评价及控制空心莲子草药材质量具有重要意义。1仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪（G1311A泵，G1316A紫外检测仪）；BP-211D型十万分之一分析天平；万分之一分析天平(METTLERTOLEDOAL204)。穆坪马兜铃酰胺（本实验室自制,HPLC法测定其纯度98％以上）供含量测定用；空心莲子草分别采自湖北、湖南、江苏、江西、福建5省，经湖北中医学院中药鉴定教研室吴和

5、珍副教授鉴定为苋科莲子草属植物空心莲子草。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为AlltechalltimaC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－水（25∶75）；流速1.0ml·min-1；检测波长220nm；柱温30℃；进样量1～20μl；理论塔板数应不低于5000。见图1。2.2对照品溶液的制备精密称取穆坪马兜铃酰胺对照品1.35mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。2.3供试品溶液的制备取空心莲子草粉末（过4号筛）10g，精密称定置于锥形瓶中，加入甲醇溶液100ml精密称重，浸渍1h后

6、，40℃超声提取提取30min，室温静置20min，再称定其重量，用甲醇溶液补足失重，摇匀，静置后滤过，取续滤液75ml置于蒸发皿中，水浴加热挥去甲醇，量取蒸馏水20ml溶解，转移至分液漏斗中，先以石油醚萃取3次（50，50，40ml），弃去石油醚液，水液再加入醋酸乙酯萃取3次（50，50，40ml），弃去水液，合并醋酸乙酯液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解，定容至10ml，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。2.4线性关系考察精密吸取对照品溶液1，5，10，15，20μl，进样，按上述色谱条件测定峰面积。以穆坪马兜铃酰胺面积为纵坐标，进样量

7、为横坐标进行线性回归，其回归方程为：Y=6965.4X－2148.5，r=0.9997,线性范围为0.0541～1.0802μg。见图2。2.5精密度实验精密吸取上述对照品溶液10μl，连续进样5次，测定峰面积，峰面积平均值为3.3899×103，RSD值为1.17％（n=5），表明仪器精密度良好。实验结果见表1。表1精密度实验结果（略）2.6稳定性实验取同一份供试品溶液，在0，2，4，6，8，12h进行测定，峰面积平均值为2.2691×103，RSD值为1.71％，表明供试品溶液至少在配制后12h内测定，穆坪马兜铃酰胺含量稳定，结

8、果见表2。表2稳定性实验结果（略）2.7重复性实验取同一批样品共6份，每份约10g，按“供试品溶液的制备”项下所述方法制备成供试品溶液，按上述色谱条件测定并计算峰面积平均值为3.7886×103，RSD值为2.15％（n=6），表明方