hcn4基因在风心二狭心房纤颤患者心房组织中mrna表达初探

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1、HCN4基因在风心二狭心房纤颤患者心房组织中mRNA表达初探作者：周华富，杨涛，冼磊，冯旭，陈铭伍【摘要】目的通过分析风湿性心脏病二尖瓣狭窄患者心房肌组织H4基因表达与心房颤动发生的关系，为风心二狭房颤发生机制奠定理论基础。方法取手术患者心耳组织100mg，提取RNA后应用半定量逆转录－PCR方法检测mRNA含量，并对PCR产物测序分析。以H4基因mRNA和内参β-actin含量的比值作为评价H4基因mRNA表达水平指标。结果测定H4基因cDNA序列同源性为100%。试验组及对照组H4基因mRNA与β-actin

2、含量的相对表达值比值（±s）分别为0.696±0.257和0.125±0.010，两组比较，差异有显著性(P<0.01）。结论H4基因的过度转录表达可能参与了调控风心二狭房颤的发生过程，揭示了H4基因作用的分子机制。【关键词】H4基因；风心二狭；心房纤颤；序列测定IncreasedatrialexpressionofH4genemRNAinatrialfibrillationpatientsitralstenosisofrheumaticheartdisease［Abstract］ObjectiveByan

3、alyzingtherelationshipbetitralstenosisofrheumaticheartdiseaseandH4geneinmusclesofrightatrium，constructingthetheoricalbasisofdevelopmentofatrialfibrillationocurringinmitralstenosisofrheumaticheartdisease.MethodsSemi-quantitativereversetranscription-PCR(RT-PCR）

4、RNAsofH4geneintheatriaoftRNAologyentalgroupandcontrolgroupRNAofH4geneinatariaincreasedsignificantlyparedightparticipateintheprogressofatrialfibrillationdevelopmentinmitralstenosisofrheumaticheartdisease，olecularmechanismofonefunctionofH4gene.［Keyitralstenosis

5、ofrheumaticheartdisease；atrialfibrillation；sequenceanalysisH4基因属于超级化激活环核苷酸门控阳离子通道基因家族（H），参与编码超极化激活阳离子电流（If）通道结构蛋白，是心脏动作电位的缓慢的舒张期自动去极化激活的一个重要组成部分，参与窦房结细胞自发性舒张期膜去极化过程，具有调控起搏的功能。心房颤动（atrialfibrillation，Af）为风湿性心脏病二尖瓣狭窄最常见和严重的并发症之一，合并房颤患者的病死率是无房颤患者的2倍。目前对风心二狭心房纤颤发

6、病机制的研究已进入分子水平。H4基因突变可能与病态窦房结综合征（sicksinussyndrome，SSS），Af等多种心律失常相关。1999年LudRNA水平分析H4基因在风心房颤二狭患者表达改变，为风心二狭房颤发生机制奠定理论基础。1材料与方法1.1临床标本病例来源于我院2007年3月～2008年3月进行二尖瓣置换术的风湿性二尖瓣狭窄患者52例，以是否并发心房颤动分为试验组和对照组。试验组患者38例，男18例，女20例，年龄26～68岁，平均（48±11）岁。对照组患者14例，男6例，女8例，年龄21～62岁

7、，平均（44±13）岁。全部标本均为术中获取右心耳心肌标本约100mg，取材后速冻于液氮中，-80℃超低温贮存备用。1.2主要的试剂和仪器RNAsimpleTotalRNAKit(总RNA提取试剂盒，TIANGEN公司，北京），RevertAidTMFirstStrandcDNASynthesisKit(逆转录试剂盒，Fermentas公司，美国），TaKaRaExTaqTM(TaKaRa公司，大连），dNTPMixture(TaKaRa公司，大连），柱式PCR产物纯化试剂盒(QIAGEN公司，德国），Therm

8、oPXE0.2PCR扩增仪(Thermo公司，美国），3730XLDNA分析系统(ABI公司，美国），紫外分光光度计（UVC-515，美国），水平凝胶电泳槽（BIO-RAD公司，美国），凝胶数字成像仪（BIO-RAD公司，美国）。1.3引物的设计及合成参考GenBank中人H4基因(NM_005477）和β-actin(NM_001101）基因的核苷酸序列，在保守区域分别