超声微泡辅助干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究论文

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1、超声微泡辅助干细胞移植治疗急性心肌梗死的实验研究论文徐琢，冯毅，童嘉毅，李金鹆，马根山,沈成兴，祁春梅，苏亚民，张晓黎.freell,应用Percoll（相对密度1.077）分离液离心提取BMMSCs,用含10%胎牛血清的低糖DMEM进行培养。在细胞接近汇合时以1∶3的比例传代。在移植前1d对细胞进行标记,在培养液中加入超顺磁氧化铁（SPIO）溶液(培养液SPIO浓度25μg·ml－1)，继续培养24h后，0.25%胰蛋白酶溶液消化贴壁细胞，悬浮备用。1.2.2AMI模型的建立家猪经股动脉穿刺行选择性左冠状动脉造影，经6F指

2、引导管送入0.014in（1in=0.0254m）导丝，导丝前端达左冠状动脉前降支(LAD)远端后固定导丝。在X射线透视下，再沿导丝导入球囊（2.0～2.5）mm×（10～15）mm至前降支中远端。球囊打开前静脉予150mg可达龙预防缺血性心律失常发生，之后以4atm(1atm=101.325kPa)扩张1、3、5min作3次缺血预适应，然后以4atm扩张60min作梗死模型，术中注意心电图改变，然后撤出球囊及导丝,再行左冠状动脉造影，结扎股动脉。1.2.3超声微泡作用和BMMSCs输注7d后再次行股动脉穿刺送入OTHz，机

3、械指数1.6，深度9cm）持续照射心尖部，随后导管内注入2mlBMMSCs悬液（1×107个细胞）。对照组无超声微泡作用以同样方法输入等量BMMSCs。1.2.4螺旋CT心功能测定BMMSCs移植前1d及移植后6周分别进行64层螺旋CT检查（西门子SOMATOMSensation64，扫描层厚0.6mm）。经容积再现、多层面重建、最大密度投影等图像后处理得到收缩末期容积、左室射血分数。1.2.5细胞鉴定、计数及梗死交界区毛细血管密度计算细胞移植后6周取梗死交界区组织切片，分别进行HE、普鲁士蓝染色及结蛋白免疫组化染色，10×

4、20倍视野下随机计数5个视野的毛细血管数、普鲁士蓝染色阳性细胞数及结蛋白免疫组化染色阳性细胞数，取其平均数。1.3统计学处理采用SPSS12.0统计软件包进行数据分析，所有数据用x-±s表示，用t检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1移植前后心脏功能与对照组比较，实验组血流动力学指标改善更为明显（表1）。表1两组家猪细胞移植前后心功能的比较与对照组及移植前比较，均P0.052.2心肌组织学检查结果与对照组比较，实验组毛细血管数、普鲁士蓝染色阳性细胞数及结蛋白免疫组化染色阳性细胞数显著增多，见图1(封三)及表2。表2

5、两组家猪移植部位心肌组织学检查结果比较3讨论自体BMMSCs移植已经应用于临床治疗缺血性心脏病，达到抑制心肌重构和改善心功能的效果［1］，但心外膜直接心肌注射、经心内膜心肌内注射或经导管冠状动脉内注射方法干细胞移植率有限。超声破坏微泡被国内外众多学者研究用于药物或基因靶向治疗，前不久日本学者Imada［2］使用超声微泡辅助BMMSCs靶向移植治疗大鼠下肢骨骼肌缺血获得成功，我们的实验主要研究超声破坏微泡结合BMMSCs移植可否促进BMMSCs吸附血管内皮，增加干细胞在梗死心肌中的移植数量，促进血管新生，增加缺血心肌血流，改善

6、梗死后心脏功能。本研究发现，超声联合微泡可以明显增加干细胞移植率，经冠状动脉输入BMMSCs后6周，梗死部位心肌组织病理学检查显示含SPIO的胞浆蓝染干细胞数量实验组明显多于对照组（71.63±14.09vs40.67±9.48，P0.05，图1B）。可能机制：超声破坏微泡产生空化效应，在内皮细胞表面形成弹坑样的可在24h内完全恢复的小孔，内皮细胞收缩，内皮间隙增宽［3］,.freelcelldeliverybyultrasound-microbubble［J］.ArteriosclerThrombVascBiol,2005

7、,25:2128-2134.［3］SKYBADM,PRICERJ,LINKAAZ,etal.Directinvivovisualizationofintravasculardestructionofmicrobubblesbyultrasoundanditslocaleffectsontissue［J］.Circulation，1998，98:290-293.［4］FUJIYAMAS,AMANOK,UEHIRAK,etal.Bonemarroonocytelineagecellsadhereoninjuredendothel

8、iuminamonocytechemoattractantprotein-1-dependentmannerandacceleratereendothelializationasendothelialprogenitorcells［J］.CircRes，2003，93:980-989.［5