lyve1在发育中大鼠肾内的表达研究论文

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1、LYVE1在发育中大鼠肾内的表达研究论文【摘要】目的探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体1染色阳性（LYVE1+）淋巴管在大鼠肾内的分布。方法胚胎期第14、16、18、20天的胎鼠，和出生后第1、4、14、21天及成年大鼠的肾脏切成厚50μm的薄片，进行LYVE1免疫组织化学染色。结果LYVE1+的淋巴管丛最早可在胚胎期第16天的大鼠肾脏检测到。在胚胎期第18天，出生后第1、4、7天和成年大鼠肾脏可见到LYVE1+丛主要位于肾脏皮质的动脉周围。LYVE1+细胞在胚胎期第14天可检测到，主要位于髓质，出生后阳性细胞数量显著增加，到出生后第21天仅在外髓

2、外带见到少量的LYVE1+细胞。结论LYVE1+淋巴管主要位于肾脏的动脉周围，LYVE1+细胞主要位于肾脏髓质。【关键词】淋巴管内皮细胞透明质酸受体肾脏淋巴管【Abstract】ObjectiveToinvestigatethedistributionofintrarenallymphaticvesselsindevelopingratusingthelymphaticmarkerLYVE1.MethodsTheratkidneysfromembryonicday14(E14)toE20,fromneonatesatpupday1(P1)toP21

3、andadultsphaticvesselsedlymphaticplexusinratkidneyattheE16stage.FromfetalstageE18toAdult,LYVE1+lymphaticvesselsainlyinthemedullaatE14.Thenumbersofthecellsincreasedgradually,thenreduced.AtP21LYVE1+cellsphaticvesselsedulla.【Keyphaticvessels在人类和各种动物包括小鼠其肾内淋巴管的分布已有研究［1～3］.freelphati

4、cendotheliumspecifichyaluronanreceptor1，LYVE1)研究大鼠肾脏内淋巴管的表达。恶性肿瘤主要通过血道和淋巴道形成远处转移，统计表明，50%以上的肿瘤经过淋巴道转移，且发生较早，因此，本研究也为肿瘤淋巴道转移机制及抗肿瘤研究提供实验基础。1材料与方法1.1材料与来源应用SpragueDamunoResearchLaboratories（稀释度1∶100），明胶、皂苷和牛血清白蛋白均购自SigmaAldrich（美国）。1.3实验方法试验动物用16.5%的乌拉坦（1ml/kg）腹腔内注射麻醉。妊娠14～16d的大鼠

5、仰卧位固定于手术台上，剖腹取胎鼠，分离胎鼠肾脏，PLP固定4°C过夜。利用振动切片机（Pelco102,Series1000;TechnicalProductsInternational,美国）将肾脏切成厚50μm组织片，放入-70°C冰箱保存。出生后14～21d及成年大鼠，PLP腹主动脉灌注固定。分离肾脏，利用超薄切片机（Leica公司，德国）切成1～2mm厚，PLP固定4°C过夜。从-70°C冰箱中取出组织，新配制的50mMNH4Cl/PBS洗10min×3次；0.3%H2O210min；缓冲液B（0.01MPBS100ml，明胶0.2g，皂苷0.05

6、g，牛血清白蛋白1.0g）洗4h。以上操作均在4°C环境中进行。在缓冲液B稀释的LYVE1中孵育，4°C过夜。第2天从冰箱取出组织，先室温放置1h，然后缓冲液C（0.01MPBS100ml，明胶0.2g，皂苷0.05g，牛血清白蛋白0.1g）洗1h。在过氧化物酶结合的驴抗兔IgG中孵育2h，缓冲液C洗30min。每孔滴加0.1%DAB300μl，滴加3%过氧化氢溶液45μl，显色10min。梯度酒精脱水，丙酮15min×2次，丙酮：环氧树脂=3∶1混合液内1h，丙酮∶环氧树脂=1∶1混合液内1h；丙酮∶环氧树脂=1∶3混合液内1h，纯环氧树脂中过夜。封片

7、，烤干。镜下观察，拍照。2结果2.1LYVE1在大鼠肾脏中的表达LYVE1+的淋巴管丛最早可在胚胎期第16天检测到（图1C）。在胚胎期第18天（图2A），出生后第1（图2B），4（图2C），7天（图2D）可见LYVE1+淋巴管丛主要位于肾脏皮质的弓形动脉和小叶间动脉周围。图1A显示成年大鼠肾脏，在皮质LYVE1主要在弓形动脉和小叶间动脉周围的淋巴管和肾小球内表达，在髓质也检测到LYVE1的表达。2.2LYVE1+单个细胞LYVE1+单个细胞最早出现在胚胎期第14天的大鼠肾脏髓质中。胚胎期，LYVE1+细胞主要位于髓质，皮质也可见到少量阳性细

8、胞(图1C、D)。出生后阳性细胞数量显著增加，出生后第4天到达顶峰