lyve1在发育中大鼠肾内的表达研究　

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1、LYVE1在发育中大鼠肾内的表达研究【摘要】目的探讨淋巴管内皮细胞透明质酸受体？1染色阳性(LYVE21+)淋巴管在大鼠肾内的分布。方法胚胎期第14、16、18、20天的胎鼠，和出生后第1、4、14、21天及成年大鼠的肾脏切成厚50um的薄片，进行LYVE?1免疫组织化学染色。结果LYVE?1+的淋巴管丛最早可在胚胎期第16天的大鼠肾脏检测到。在胚胎期第18天，出生后第1、4、7天和成年大鼠肾脏可见到LYVE?1+丛主要位于肾脏皮质的动脉周围。LYVE?1+细胞在胚胎期第14天可检测到，主要位于髓质，出生后阳性细胞数量显著增加，到出生后第21天仅在外

2、髓外带见到少量的LYVE71+细胞。结论LYVE?1+淋巴管主要位于肾脏的动脉周围，LYVE?1+细胞主要位于肾脏髓质。【关键词】淋巴管内皮细胞透明质酸受体肾脏淋巴管[Abstract】ObjectiveToinvestigatethedistributionofintrarenallymphaticvesselsindevelopingratusingthelymphaticmarkerLYVE?Theratkidneysfromembryonicday14(E14)toE20,fromneonatesatpupday1(Pl)toP21andad

3、ultswereLYVE?l+lymphaticvesselsweredetectedandformedlymphaticplexusinratkidneyattheE16stage.Fromfeta.lsta.geEl8toAdult,LYVE?l+lymphaticvesselsweredistributedalongarteriesincortex.LYVE?1+cellsappearedmainlyinthemedullaatE14.Thenumbersofthece11sincreasedgradually,thenreduced.AtP2

4、1LYVE?1+cellswereonlyinLYVE?1+lymphaticvesselsweredistributedalongarteriesandLYVE?l+cellswerelocatedinmedu11a.【Keywords］LYVE?1,kidney,1ymphaticvessels在人类和各种动物包括小鼠其肾内淋巴管的分布己有研宄［1〜3］，但是，对发育中肾脏内的淋巴管的来源和分布目前知之不多。本实验应用淋巴管内皮细胞特异标记物淋巴管内皮细胞透明质酸受体？1(1ymphaticendotheliumspecifichyalurona

5、nreceptor?l，LYVE?1)研究大鼠肾脏内淋巴管的表达。恶性肿瘤主要通过血道和淋巴道形成远处转移，统计表明，50%以上的肿瘤经过淋巴道转移，且发生较早，因此，本研宄也为肿瘤淋巴道转移机制及抗肿瘤研宄提供实验基础。1材料与方法材料与来源应用SpragueDawley大鼠，试验动物的饲养及试验操作符合韩国加图立大学动物保护协会的要求。孕鼠由韩国加图立大学医学院动物中心提供。出生前大鼠肾脏来自于胚胎期第14、16、18、20天的胎鼠，出生后肾脏由生后第1、4、14、21天及成年的大鼠获得。每个年龄段应用3〜4只。主要试剂兔抗小鼠多克隆抗体LYVE

6、?1购自ResearchDiagnosticsInc（稀释度1:1000）;过氧化物酶连接的驴抗兔IgG购自JacksonlmmunoResearchLaboratories（稀释度1:100），明胶、皂苷和牛血清白蛋白均购自Sigma?Aldrich（美国）。实验方法试验动物用％的乌拉坦（lml/kg）腹腔内注射麻醉。妊娠14〜16d的大鼠仰卧位固定于手术台上，剖腹取胎鼠，分离胎鼠肾脏，PLP固定4°C过夜。利用振动切片机（Pelcol02,Series1000;TechnicalProductsInternational，美国）将肾脏切成厚50y

7、m组织片，放入-70°C冰箱保存。出生后14〜21d及成年大鼠，PLP腹主动脉灌注固定。分离肾脏，利用超薄切片机（Leica公司，德国）切成1〜2mm厚，PLP固定4°C过夜。从-70°C冰箱中取出组织，新配制的50mMNH4C1/PBS洗10minX3次；%H2021Omin；缓冲液B（MPBSlOOml，明胶g，皂苷g，牛血清白蛋白g）洗4h。以上操作均在4°C环境中进行。在缓冲液B稀释的LYVE?1中孵育，4°C过夜。第2天从冰箱取出组织，先室温放置lh，然后缓冲液C（MPBSlOOml,明胶g，皂苷g，牛血清白蛋白g）洗lh。在过氧化物酶结合

8、的驴抗兔IgG中孵育2h，缓冲液C洗3Omino每孔滴加%DAB300yb滴加3%过氧化氢溶液45y1，显色