intermedin在两肾一夹高血压大鼠中的表达

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1、Intermedin在两肾一夹高血压大鼠中的表达作者：梁颖，薛立华，黎济荣，闫琳，芦宁清，贾月霞【摘要】目的观察Intermedin(IMD)在两肾一夹(2-kidney1-clip，2K1C)高血压大鼠肾脏和腹主动脉中的变化及其意义。方法采用2K1C复制肾性高血压大鼠模型，随机分为正常组、模型组。分别测定平均颈动脉压(mCAP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力变化最大速率(LV±dp/dtmax)，左心重与体重比值(LVM/BW)及右肾重与左肾重比值(RK/LK)。免疫组化法检测IMD的水平。结果模型组大鼠mCAP和LVEDP比正常组升高

2、48.23%、340%(P均<0.01)，LV+dp/dtmax和LV-dp/dtmax降低51.26%和24.65%(P均<0.01)，LVM/BW以及RK/LK升高36.77%(P<0.05)、26.35%(P<0.01);与正常组比较模型组肾脏和腹主动脉IMD的含量分别增加了26.15倍和4.80倍(均P<0.01)。结论肾性高血压大鼠引起肾脏和腹主动脉IMD蛋白表达增加，其变化可能参与了肾性高血压的发病过程。【关键词】Intermedin;两肾一夹;肾性高血压;免疫组化8高血压是心血管系统的常见多发病，可引起心、脑

3、、肾等靶器官的损害，对患者的危害极大。中叶素(intermedin,IMD)是Roh等人在2004年[1]用系统进化分析法以降钙素基因相关肽(calcitoningene-relatedpep-tide，CGRP)超家族成员特异的一二级结构检索基因库得到的该家族的一个新成员。初步的功能研究显示，在心血管系统IMD具有CGRP超家族成员如肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)相似甚至更强的舒张血管、降低血压等生物学效应。本研究建立2K1C高血压大鼠模型，旨在观察IMD在肾脏和腹主动脉中的表达及其意义。　　1材料和方法　　1.1主要试剂及仪器

4、BP-6动物无创血压测量系统和BL-420F+生物机能实验系统均由成都泰盟科技有限公司提供，OLYMPUS显微镜、IPP6.0(Mediacybermeticsinc)、兔抗IMD单抗由美国PhoenixPharmaceuticalINC提供，二抗(PV-9001)即用型试剂盒、DAB试剂盒和PBS缓冲剂均购于北京中杉金桥生物技术公司。　　1.2动物模型的建立和分组雄性SD大鼠(购自宁夏医科大学实验动物中心)，体重170～180g，在清洁级动物房喂养，饲以普通饲料(由本校实验动物中心提供)，自由饮水，适应性饲养3d后进行实验。按傅继华[2]2K1C高血

5、压模型复制的方法，制作2K1C模型，20只雄性SD大鼠随机均分为正常组、模型组，术前禁食过夜，自由饮水，用1%戊巴比妥钠(35mg·8kg-1)麻醉，上腹部正中切口，沿腹白线逐层分离，暴露肾脏及肾动静脉，玻璃分针分离动静脉，用直径为0.2mm的银夹钳夹左肾动脉，使其部分狭窄制作2K1C高血压模型。正常组除不放置银夹外，其余手术操作同上，术后正常进食与喂水。术后3d给予青霉素50000U腹腔注射预防感染。　　1.3血流动力学的测量和标本的留取正常饲养4周后，麻醉，称重，左颈总动脉插管连接BL-420E+生理记录仪记录mCAP(颈动脉平均压)、LVEDP(

6、左心室舒张末期压)及LV±dp/dtmax，并计算RK/LK、LVM/BW(左心重与体重比)，然后从插管处放血处死动物，摘取肾脏和腹主动脉。取肾脏组织最大切面和腹主动脉横切面用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片。　　1.4免疫组织化学方法检测IMD在肾脏和腹主动脉组织中蛋白的表达肾脏和腹主动脉组织切片脱蜡入水，蒸馏水洗5min，PBS洗5min×2次，滴加1滴3%H2O2溶液，室温放置15min，PBS洗5min×3次，滴加10%正常山羊血清封闭20min，室温20min，甩净不洗，滴加兔抗IMD单抗(1∶500工作浓度)，4℃孵育过夜，室温复温30

7、min，PBS洗3min×3次，滴加扩增剂室温放置20min，PBS洗3min×3次，滴加二抗室温静置30min，PBS洗3min×3次，DAB染色3~5min，显微镜下观察染色程度，蒸馏水终止反应，苏木素复染30s，1%盐酸酒精分化，自来水返蓝，常规脱水透明，中性树胶封片，镜检。结果判定：用低倍和高倍镜观察切片，阳性细胞为镜下组织细胞结构清晰，胞浆染成棕黄色，染色明显高于背景。应用IPP6.0(Mediacybermetics8inc)对表达结果进行半定量分析(以累积光密度进行比较)。　　1.5统计学方法结果以均数±标准差(±s)表示，两组间比较采用

8、t检验，P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1鼠尾动脉压各组术前收缩压(S