多西紫杉醇对人胃癌细胞株mkn论文

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1、多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN论文王彩莲，陈宝安,余卫平,高峰,宋萍［摘要］目的:研究多西紫杉醇对人胃腺癌MKN45细胞的生长抑制作用及诱导人胃腺癌细胞凋亡作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测细胞周期分布和凋亡率，应用电镜观察细胞凋亡的形态特点。结果:（1）多西紫杉醇在125~80μgml-1质量浓度范围内对MKN45细胞株有抑制增殖作用，此作用与药物质量浓度呈正相关。（2）终质量浓度为20μgml-1的多西紫杉醇作用于MKN45细胞8h有凋亡峰的出现，12h凋亡率接近50

2、％。（3）以20μgml-1的多西紫杉醇诱导MKN45细胞凋亡3h和6h与未加药的对照组比较，可见MKN45细胞周期被阻滞在G2/M期，S期比例减少。（4）20μgml-1的多西紫杉醇作用MKN45细胞12h.freelega产品），四甲基偶氮唑盐（MTT）、多西紫杉醇（法国安万特公司），2％戊二醛（中国人民解放军南京军区总医院电镜室提供）。112实验细胞人胃腺癌MKN45细胞株由东南大学基础医学院遗传中心提供。113主要器材二氧化碳培养箱：GBB16，Heraeus公司，德国。酶标仪：Model

3、550，BioRad公司，日本。倒置显微镜:重庆光学仪器厂。医用净化工作台（YJ875B）：苏州净化仪器厂。水平式离心机：上海医疗器械厂。流式细胞仪：FACSCcaliber，美国BD公司。电子显微镜：JEM1200EX，日本。12方法1.2.1增殖抑制试验人胃腺癌MKN45细胞株培养于含10％新生牛血清RPMI1640培养液中。细胞置于37℃含5％湿饱和的CO2培养箱中，每3~4d传代1次。取对数生长期的MKN45细胞，去培养液，用025％胰蛋白酶消化成单个细胞，加入RPMI1640培养液中止消

4、化，离心，去上清液，加入RPMI1640培养液混匀，计数。将含有MKN45细胞的10％小牛血清RPMI1640培养液接种于96孔培养板上，每孔加入培养液200μl，细胞密度为9×103ml-1，置于37℃含5％湿饱和的CO2培养箱中。细胞贴壁生长后，吸出培养液，每孔中加入200μl含多西紫杉醇的RPMI1640125~80μgml-1，每个浓度设6个复孔。实验设有空白对照组，对照组设6个复孔。将96孔板置于37℃含5％湿饱和的CO2培养箱中培养24h。去96孔板中的上清液，每孔中加入20μlMTT

5、（5mgml-1）孵育4h后，去上清液，加入二甲亚砜（DMSO）终止反应，充分微震荡后，用DG3022A型酶标仪于波长为570nm处测吸光率。以SAS软件系统进行结果的统计学分析。用方差分析检验吸光度。用Probit回归模型计算IC50及95％的可信限。122流式细胞仪测定取对数生长期的人MKN45胃腺癌细胞7瓶，每瓶细胞总数106个。去培养液，在培养瓶内分别加入溶有多西紫杉醇的培养液，药物质量浓度分别为20和10μgml-1，置于5％CO2培养箱内3、6h，试验设对照组。以药物质量浓度20μgm

6、l-1干预的细胞分别于3、6、8、10、12、24h吸出含有药物的培养液，并加入025％胰蛋白酶消化细胞，中止消化，离心，去上清液，加入PBS，混匀，送流式细胞仪检测。以药物浓度10μgml-1干预的细胞于24h吸出含有药物的培养液，余处理同上。123电镜观察取对数生长期的人胃腺癌MKN45细胞，共3瓶。去培养液，在培养瓶内分别加入溶有多西紫杉醇的培养液，药物质量浓度为20μgml-1，置于5％CO2培养箱。于12h中止药物作用，去含有药物的培养液，加入025％的胰蛋白酶消化细胞成单个细胞。加入含

7、小牛血清的RPMI1640培养液中止消化，离心，去上清液，加入2％戊二醛，固定细胞，送电境检查。2结果根据药物质量浓度与抑制率的关系，经过Probit回归模型分析，IC50=9436μgml-1，95％的可信限为786~1132μgml-1。见表1。表1多西紫杉醇对MKN45细胞增殖抑制率（略）注：空白对照组平均吸光度值为1.472，细胞增殖抑制率＝［（空白对照组平均吸光度值－实验组平均吸光度值）/空白对照组平均吸光度值］×100％当药物质量浓度为20μgml-1时，8h测得的细胞凋亡率为2988

8、％,10h为3952％,12h为4827％；24h时，部分细胞溶解，部分细胞碎裂，离心未形成细胞团块。虽然3、6h未见有凋亡发生，但可见明显的细胞周期阻滞。3h药物组的G2/M期比例为1459％，S期的比例为4500％；空白对照组G2/M期比例1011％，S期的比例为5159％。6h药物组的G2/M期比例为20％，S期的比例为3218％；空白对照组G2/M期比例1113％，S期的比例为4066％。以20μgml-1的药物质量浓度作用12h，人胃腺癌MKN45细胞出现了典型的凋亡形态