fhit基因过表达对人胃癌细胞系mkn

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1、FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN：黄照权，刘飞，黄培林，李楠，徐佳佳，吴鹏【摘要】　　目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45，分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力（P<0.05），但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能

2、力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成，对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。【关键词】FHIT胃肿瘤细胞增殖克隆分子基因转染细胞粘附　　Abstract:ObjectiveToevaluatetheeffectsofFHITgeneover-expressiononhumangastriccancercelllineMKN-45proliferationandadhesion.MethodsHumanxenogenouseukaryoticexpressio

3、nplasmidpcDNA3.1-FHITRNA-negativehumangastriccelllineMKN-45.AMTTassay,plateclony-formingtestandadhesiontestedtoassesstheMKN-45cells'proliferativeactivity,clony-formingcapabilityandadhesiveabilitybeforeandaftertransfection.ResultsFHITover-expressioncanreduceMKN-

4、45cells'proliferationandclony-formingcapability(P<0.05),butitingabilityofhumangastriccelllineMKN-45,itdosenots;cellproliferation;cloning,molecular;genes;transfection;celladhesion　　胃癌的发生已被公认是一个多基因、多步骤过程，涉及ras、p27等癌基因，p53、APC等抑癌基因，但完整的胃癌发生基因谱仍不清楚。脆性组氨酸三联体(frag

5、ilehistidinetriad,FHIT)基因是Ohta等于1996年从上皮癌细胞系3p14.2区域克隆出的一个候选抑癌基因，该基因在所有检测过的人正常组织中都表达；但在多种肿瘤组织和细胞系中，FHIT基因结构及表达异常［1～3］。我们将成功构建的含FHIT基因的真核表达载体pcDNA3.1-FHIT转染至人胃癌细胞系MKN-45中，得到稳定的过表达，观察转染前后MKN-45细胞系增殖、克隆形成、细胞粘附等方面生物学行为的变化，以探讨FHIT基因对胃癌的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1细胞系和材

6、料　　人低分化胃腺癌细胞系MKN-45、人脐静脉内皮细胞系ECV304，由东南大学临床医学院中心实验室馈赠。真核表达质粒pcDNA3.1购自Invitrogen公司。　　1.1.2主要试剂RPMI1640培养基购自美国Gibco公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，脂质体Lipofectamin2000购自美国Invitrogen公司。二甲基亚砜购自上海凌峰化学试剂有限公司，MTT购自Promega公司，其它生化试剂均为分析纯。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养人低分化胃腺癌细胞系MKN-45、人脐静脉内皮细胞系ECV

7、304，在37℃、5%CO2培养箱中培养，培养液为含10%小牛血清、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素的RPMI1640。　　1.2.2真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT的转染参照说明书，用lipofectamine2000将真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染至FHIT基因mRNA阴性表达的人胃癌细胞系MKN-45。转染后采用G418筛选阳性克隆，并且继续培养。用RT-PCR法检测FHIT基因mRNA的表达。转染组细胞有目的基因条带出现，而转染空质粒组和阴性对照组均无目的条带出现，证明转染成功。　

8、　1.2.3MTT法检测细胞增殖活性分别收集空白对照组、pcDNA3.1转染组和pcDNA3.1-FHIT转染组处于对数期的细胞，调整细胞悬液浓度，分于96孔板，1×104/孔。置37℃，5%CO2培养箱培养使细胞贴壁。根据不同组别，12、36、60、84h后检测细胞活性。检测时小心吸去上清，PBS轻轻洗涤，再次弃上清。每孔加入180μl新鲜R