多西紫杉醇对人胃癌细胞株mkn

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1、多西紫杉醇对人胃癌细胞株MKN王彩莲，陈宝安,余卫平,高峰,宋萍　〔摘要〕目的:研究多西紫杉醇对人胃腺癌MKN45细胞的生长抑制作用及诱导人胃腺癌细胞凋亡作用。方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率，流式细胞技术检测细胞周期分布和凋亡率，应用电镜观察细胞凋亡的形态特点。结果:（1）多西紫杉醇在125~80μg・ml-1质量浓度范围内对MKN45细胞株有抑制增殖作用，此作用与药物质量浓度呈正相关。（2）终质量浓度为20μg・ml-1的多西紫杉醇作用于MKN45细胞8h有凋亡峰的出现，12h凋亡率接近50％。（3）以20μg・ml-1的多

2、西紫杉醇诱导MKN45细胞凋亡3h和6h与未加药的对照组比较，可见MKN45细胞周期被阻滞在G2/M期，S期比例减少。（4）20μg・ml-1的多西紫杉醇作用MKN45细胞12h，可见典型的凋亡形态学改变。结论:多西紫杉醇可抑制人胃腺癌MKN45细胞增殖，诱导MKN45细胞凋亡。　　〔关键词〕人胃腺癌细胞株；多西紫杉醇；细胞增殖抑制；细胞凋亡　　胃癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内，胃癌的发病率位居所有恶性肿瘤的第二位，死亡率为癌症死亡的第四位〔1〕。在我国其发病率及死亡率居恶性肿瘤之首位。近几年来，多西紫杉醇治疗晚期胃癌

3、的临床研究已取得了非常肯定的结果，单药多西紫杉醇治疗晚期胃癌的总有效率为17％～24％〔2〕。本研究拟对多西紫杉醇治疗胃癌的作用机理进行研究，为其在临床使用提供理论依据。　　1材料与方法　　11材料　　111主要试剂RPMI1640培养液(GIBCO公司，美国)，小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所)，025％胰酶、Hepes（AMRESCO分装）、二甲亚砜（DMSO）（Promega产品），四甲基偶氮唑盐（MTT）、多西紫杉醇（法国安万特公司），2％戊二醛（中国人民解放军南京军区总医院电镜室提供）。　　112实验细胞人胃腺癌MK

4、N45细胞株由东南大学基础医学院遗传中心提供。　　113主要器材二氧化碳培养箱：GBB16，Heraeus公司，德国。酶标仪：Model550，BioRad公司，日本。倒置显微镜:重庆光学仪器厂。医用净化工作台（YJ875B）：苏州净化仪器厂。水平式离心机：上海医疗器械厂。流式细胞仪：FACSCcaliber，美国BD公司。电子显微镜：JEM1200EX，日本。　　12方法　　1.2.1增殖抑制试验人胃腺癌MKN45细胞株培养于含10％新生牛血清RPMI1640培养液中。细胞置于37℃含5％湿饱和的CO2培养箱中，每3~4d传代1次

5、。取对数生长期的MKN45细胞，去培养液，用025％胰蛋白酶消化成单个细胞，加入RPMI1640培养液中止消化，离心，去上清液，加入RPMI1640培养液混匀，计数。将含有MKN45细胞的10％小牛血清RPMI1640培养液接种于96孔培养板上，每孔加入培养液200μl，细胞密度为9×103ml-1，置于37℃含5％湿饱和的CO2培养箱中。细胞贴壁生长后，吸出培养液，每孔中加入200μl含多西紫杉醇的RPMI1640125~80μg・ml-1，每个浓度设6个复孔。实验设有空白对照组，对照组设6个复孔。将96孔板置于37℃含5％湿饱和

6、的CO2培养箱中培养24h。去96孔板中的上清液，每孔中加入20μlMTT（5mg・ml-1）孵育4h后，去上清液，加入二甲亚砜（DMSO）终止反应，充分微震荡后，用DG3022A型酶标仪于波长为570nm处测吸光率。以SAS软件系统进行结果的统计学分析。用方差分析检验吸光度。用Probit回归模型计算IC50及95％的可信限。　　122流式细胞仪测定取对数生长期的人MKN45胃腺癌细胞7瓶，每瓶细胞总数>106个。去培养液，在培养瓶内分别加入溶有多西紫杉醇的培养液，药物质量浓度分别为20和10μg・ml-1，置于5％CO2培

7、养箱内3、6h，试验设对照组。以药物质量浓度20μg・ml-1干预的细胞分别于3、6、8、10、12、24h吸出含有药物的培养液，并加入025％胰蛋白酶消化细胞，中止消化，离心，去上清液，加入PBS，混匀，送流式细胞仪检测。以药物浓度10μg・ml-1干预的细胞于24h吸出含有药物的培养液，余处理同上。　　123电镜观察取对数生长期的人胃腺癌MKN45细胞，共3瓶。去培养液，在培养瓶内分别加入溶有多西紫杉醇的培养液，药物质量浓度为20μg・ml-1，置于5％CO2培养箱。于12h中止药物作用，去含有药物的培养液，加入025％的胰蛋白

8、酶消化细胞成单个细胞。加入含小牛血清的RPMI1640培养液中止消化，离心，去上清液，加入2％戊二醛，固定细胞，送电境检查。　　2结果　　根据药物质量浓度与抑制率的关系，经过Probit回归模型分析，IC50=9436μg・ml-1，