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《增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸调节脐血cd34+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸调节脐血CD34+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应【摘要】目的:探讨低浓度增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸(PA_ASODN)调节脐血造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应。方法:用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离出CD34+细胞,先后加入低浓度PA_ASODN作用于体外培养的CD34+细胞,用流式细胞仪检测培养后各种细胞的数量及细胞周期的变化。结果:实验组脐血CD34+造血前体细胞明显被扩增，但以第72h组的扩增效应最为显著，其CD34+细胞比例增高［(35.6±1.8)%］,
2、而CD34+CD38－细胞数量扩增达(55.1±4.2)倍，且G0/G1期细胞占(49.8±2.5)%。结论:低浓度PA_ASODN对脐血CD34+造血前体细胞体外扩增的调节具有时间效应,同时能延缓扩增过程中伴随的细胞分化。【关键词】增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸造血前体细胞体外扩增 ［Abstract］Objective:TostudythetimeeffectoflobilicalcordbloodCD34+ hematopoieticprecursorcellsinvitro.Methods:CD34+
3、 cellsfreshumbilicalcordbloodbyimmunomagicbeads,andincubatedinliquidculturesystematdifferenttime.Usingfloetry,thenumberofdifferentkindsofstem/progenitorcellsandcellcyclebilicalcordbloodCD34+hematopoieticprecursorcellsintheexperimentalgroupeeffectontheexpansi
4、onofCD34+ cells,andreducesitsdifferentiationatopoieticprecursorcell;expansioninvitro 近年脐血干细胞移植在治疗血液肿瘤和骨髓衰竭综合征方面取得了巨大成就，但由于单份脐血所能获得的造血干/祖细胞数量有限,限制了其在临床的广泛应用。脐血前体细胞的体外扩增是解决这一难题的有效途径之一，但扩增的同时不可避免地伴随细胞的分化成熟,从而影响了其重建长期造血的能力。如何在扩增造血前体细胞的同时尽可能地保留其自我更新能力和多向分化潜能，成为当
5、前另一个研究热点。研究表明,造血前体细胞的增殖分化过程不但受控于细胞因子,同时与细胞周期调控因子密切相关［1,2］。增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PA)是重要的细胞周期调控蛋白,在造血细胞增殖发育过程中也发挥重要作用［3］。本研究旨在不同时间段通过反义核酸技术调控PA在脐血CD34+细胞中的表达,探索PA_反义寡脱氧核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)调节脐血CD34+细胞体外扩增和分化的时间效应，寻找PA_ASODN
6、作用的最佳时间点，使脐血CD34+细胞在体外扩增的同时能延缓其分化进程,以期达到更好地扩增效果。 1资料与方法 1.1脐血采集和分离 选择健康孕妇、足月顺产胎儿5例(均来自汕头市妇幼保健医院产科),用一次性采血袋(规格200mL,内含25mL CP2DA抗凝剂)采集脐血样品5份。平均采血量55～80mL,样品在采集6h内分选。细胞悬液经体积分数0.6％的ACD_A缓冲液稀释,聚蔗糖_泛影葡胺(相对密度1.077)梯度离心。收集界面层单个核细胞(MNC),洗涤备用。 1.2CD34+细胞分离纯化 采用m
7、iniMACS磁珠分选系统进行分选，所用分选试剂盒为直接CD34祖细胞分选试剂盒(MiltenyiBiotec公司，德国)。标记细胞通过置于磁场中的分离柱,洗脱除去CD34-细胞,将分离柱移出磁场,加压洗脱,收集CD34+细胞,锥虫蓝染色检测其活力,流式细胞仪检测其纯度及CD34+CD38－细胞的百分比，所用标记抗体为CD34_FITC(MiltenyiBiotec公司，德国)、CD38_PE(eBioscience公司，美国)。 1.3PA_ASODN合成 PA_ASODN(上海生工生物工程有限公司合成)
8、保存在-20℃冰箱中，其序列:5′>GACCAGG_GGCGCCTCG_AA<3′。 1.4实验分组 IMDM培养基中含体积分数20%胎牛血清(FCS),加入造血生长因子(μg/L):细胞因子浓度分别为重组人Flt3_配体50、重组人干细胞生长因子50、重组人血小板生成素50、重组人白细胞介素_320、重组人白细胞介素_620,总体积1mL。分4组培养:对照组(未加PA
