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《增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸调节脐血cd34+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸调节脐血CD34+造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应【摘要】目的:探讨低浓度增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸(PCNA_ASODN)调节脐血造血前体细胞体外扩增和分化的时间效应。方法:用免疫磁珠分离技术从新鲜脐带血中分离出CD34+细胞,先后加入低浓度PCNA_ASODN作用于体外培养的CD34+细胞,用流式细胞仪检测培养后各种细胞的数量及细胞周期的变化。结果:实验组脐血CD34+造血前体细胞明显被扩增，但以第72h组的扩增效应最为显著，其CD34+细胞比例增高［(35.6±1.8)
2、%］,而CD34+CD38－细胞数量扩增达(55.1±4.2)倍，且G0/G1期细胞占(49.8±2.5)%。结论:低浓度PCNA_ASODN对脐血CD34+造血前体细胞体外扩增的调节具有时间效应,同时能延缓扩增过程中伴随的细胞分化。【关键词】增殖细胞核抗原反义寡脱氧核苷酸造血前体细胞体外扩增 ［Abstract］Objective:Tostudythetimeeffectoflowconcentrationproliferatingcellnuclearantigenantisenseoligodeoxynu
3、cleotide(PCNA_ASODN)ontheexpansionanddifferentiationofumbilicalcordbloodCD34+ hematopoieticprecursorcellsinvitro.Methods:CD34+ cellswerepurified13fromfreshumbilicalcordbloodbyimmunomagneticbeads,andincubatedinliquidculturesystemwithlowconcentrationPCNA_ASODNw
4、hichaddedintotheculturesystematdifferenttime.Usingflowcytometry,thenumberofdifferentkindsofstem/progenitorcellsandcellcycleweredetectedafterCD34+ cellsincubatedfor7days.Results:TheumbilicalcordbloodCD34+hematopoieticprecursorcellsintheexperimentalgroupwereobv
5、iouslyexpanded,especiallyinthe72hoursgroup.ThepercentageofCD34+ cellsinthe72hoursgroupwasincreasedto(35.6±1.8)%,CD34+CD38－ cellswereexpanded(55.1±4.2)folds,and(49.8±2.5)%cellswereinG0/G1phase.Conclusion:LowconcentrationPCNA_ASODNhasthetimeeffectontheexpansion
6、ofCD34+ cells,andreducesitsdifferentiationwhenCD34+ cellsareexpandedinvitro. ［KeyWords］proliferatingcellnuclearantigenantisenseoligodeoxynucleotide;hematopoieticprecursorcell;expansioninvitro13 近年脐血干细胞移植在治疗血液肿瘤和骨髓衰竭综合征方面取得了巨大成就，但由于单份脐血所能获得的造血干/祖细胞数量有限,限制了其在
7、临床的广泛应用。脐血前体细胞的体外扩增是解决这一难题的有效途径之一，但扩增的同时不可避免地伴随细胞的分化成熟,从而影响了其重建长期造血的能力。如何在扩增造血前体细胞的同时尽可能地保留其自我更新能力和多向分化潜能，成为当前另一个研究热点。研究表明,造血前体细胞的增殖分化过程不但受控于细胞因子,同时与细胞周期调控因子密切相关［1,2］。增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)是重要的细胞周期调控蛋白,在造血细胞增殖发育过程中也发挥重要作用［3］。本研究旨在不同时间段通
8、过反义核酸技术调控PCNA在脐血CD34+细胞中的表达,探索PCNA_反义寡脱氧核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)调节脐血CD34+细胞体外扩增和分化的时间效应，寻找PCNA_ASODN作用的最佳时间点，使脐血CD34+细胞在体外扩增的同时能延缓其分化进程,以期达到更好地扩增效果。 1资料与方法 1.1脐血采集和分离 选
