正交设计重复实验法优选丹参骨宝酸提取工艺的最佳条件论文

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1、正交设计重复实验法优选丹参骨宝酸提取工艺的最佳条件论文刘力名，吕应年，崔燎，吴铁【摘要】目的采用正交实验考察丹参骨宝的酸提取液制备工艺的最佳条件。方法以丹参素钠与丹酚酸B含量之比作为评价指标，对溶剂（A）、溶剂量（B）、提取时间（C）、提取次数（D）等4个因素的3个水平进行L9(34)正交实验。结果直观分析和方差分析显示酸提取工艺因素的影响大小依次是：溶剂溶剂量提取时间提取次数，最佳提取工艺条件为A3B2C1D3，即5g丹参粗粉加4%盐酸50ml回流提取0.5h，共提取3次。结论通过正交实验筛选出了丹参骨宝最佳的酸提条件。【关键词】丹参骨宝正

2、交设计高效液相色谱法Abstract：ObjectiveToobtaintheoptimizationconditionforpreparationofDanshenGubaoacidextractionsolutionusingorthogonaldesign.MethodsUsingtheratioofcontentsofDanshensuNaandSalvianolicAcidBasanevaluationstandard,theL9(34)experimente(C,h),numberofextractiontimes(D).Resu

3、ltsTheoptimizedextractionconditionscalculatedbytheintuitiveanalysisandANOVAl4%hydrochloricacidingandboilingfor0.5h.Thegruffsesaccordingtoaboveprocedure.ConclusionTheoptimizationconditionsforacidextractionofDanshenGubaoiltiorrhizaBunge）的干燥根及根茎，具有祛淤止痛，活血通经，清心除烦的功效［1］。丹参的主要成分按照

4、极性可分为脂溶性的丹参酮类化合物和水溶性的酚酸类化合物。丹参水溶性有效成分一般采用传统的水煎煮法提取，提取液中一般含有较多的丹酚酸B（约为生药量的2.7%），而丹参素的含量则较少（约为生药量的0.4%），此外还含有原儿茶醛等有效成分［2］。近年来，我们课题组发现丹参水溶性有效成分尤其是丹参素和丹酚酸B及原儿茶醛可促进成骨细胞活性从而有效预防糖皮质激素引起的大鼠骨质疏松［3，4］。进一步的体外研究发现，与传统的水提法制备的丹参提取液相比，通过酸提法制备的丹参骨宝提取液对成骨细胞的活性显著增强［5］。目前丹参水溶性成分的提取方法主要有水煎回流法、超

5、声提取法等，通过这些提取方法制备的提取液中丹酚酸B的含量均比丹参素的含量高。通过解析丹酚酸B和丹参素的化学结构发现，丹酚酸B为三分子丹参素与一分子咖啡酸的缩合物［6］。前期实验发现，长时间加热或者酸性环境均会使丹酚酸B水解，导致丹酚酸B含量降低而丹参素含量增加。从节省时间考虑，本实验采用酸回流提取法制备丹参骨宝提取液。为了保证丹参骨宝提取液中丹参素与丹酚酸B的含量相当以及提取工艺的稳定性，本实验采用有重复的L9(34)正交实验设计，以丹参素与丹酚酸B含量之比为评价指标，考察溶剂、溶剂加入量、提取时间、提取次数对评价指标的影响，确定了丹参骨宝提取

6、液的合理可行的酸提取制备工艺。1材料与仪器1.1药品与试剂丹参素钠（批号110855200507）、丹酚酸B对照品（批号111562200403），由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用；丹参饮片（产地河北，湛江市恒生药业有限公司）；甲醇为色谱纯（天津四友试剂公司）；水为实验室自制三蒸水；其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为ThermoHypersilC18(5μm，4.6mm×250mm);流动相为以甲醇（A相）1%冰醋酸水溶液（V/V，B相）为流动相进行线性梯度洗脱:0～9min:10%A，9～27min:10%

7、A～64%A,27～30min:64%A～10%A，流速为1ml·min-1，检测波长为280nm；柱温30℃。2.2对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品0.0015g，丹酚酸B对照品0.0025g，溶于2ml20%甲醇水溶液中，超声助溶5min，即得储备液，其中丹参素钠及丹酚酸B浓度分别为0.75mg·ml-1，1.25mg·ml-1。2.3供试品溶液的制备丹参饮片放烘箱于60℃干燥12h后粉碎成40目粗粉。称取5g丹参粉，加入适量的溶剂，置于电热恒温加热套上回流加热，提取结束后过滤，滤液用蒸馏水适当稀释，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即

8、得供试品溶液。2.4线性关系的考察将储备液用20%甲醇水溶液逐次等倍稀释，配制成一系列含有丹参素钠和丹酚酸B的标准溶液。精密吸取上述标准溶液各20μl