阳离子选择性耗尽进样胶束扫集法测定尿液中的麻黄碱和可待因论文

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1、阳离子选择性耗尽进样胶束扫集法测定尿液中的麻黄碱和可待因论文李斯光李海燕蔡卓程昊李利军【摘要】联用选择性耗尽进样和胶束扫集两种在线富集技术，建立了尿样中麻黄碱和可待因含量测定的灵敏方法，并通过日内、日间、柱间实验考察了方法的稳定性。胶束扫集电动色谱缓冲体系为80mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)20mmol/LNaH2PO4(pH2.20)18%乙腈(V/V)，分离电压-20kV，进样电压10kV，进样时间150s，测量波长200nm。同时讨论了pH值、SDS浓度、选择性耗尽进样萃取液电导、进样

2、电压、进样时间和进水长度等对分离效果的影响。结果显示，方法富集功能很强.freel×50μm，40.0cm)，检测波长200nm。UV2102PC型紫外可见分光光度计(美国Unico公司);SXZ81光学显微镜(梧州光学仪器厂);DL60D超声波清洗器(上海之信公司)，分析天平(美国奥豪斯上海公司);MettlertoldedoDelta320型酸度计(瑞士梅特勒托利多公司);DDS11A电导率仪(上海雷磁公司)。2.2实验方法配制盐酸麻黄碱、磷酸可待因和盐酸曲马多标准贮备液，浓度分别为416

3、,400和492mg/L，置于冰箱中4℃保存。pH值及电导率均使用85%H3PO4调节。所有溶液进入毛细管前均用0.45μm滤膜过滤，超声脱气。实验前依次用1mol/LNaOH溶液、水、萃取缓冲液分别冲洗10min。选择性耗进样胶束扫集方法：先将毛细管充满萃取缓冲液，10kV下进样150s，迅速采用-20kV进行分离。两次进样间毛细管用萃取缓冲液冲洗5min。日内实验：对同一标准品，每隔2h测定一次，连续测定5次，统计。日间实验：配制标准样品溶液，等分成5份，每天取一份测定3次，连续测定7d，统计。柱

4、间实验：截取等长毛细管柱3根(同批次，并在显微镜下对进样端进行修整)，使用同一标准样品，每根柱子测定3次，统计。尿样采自服用磷酸可待因口服液的病人。取100μL尿样，加入5μL2.5mol/LNaOH，再加入乙酸乙酯2.00mL，旋涡振荡10min，3000r/min离心5min，取乙酸乙酯层100μL，加入5μL0.05mol/LHCl，45℃下减压蒸干，残余物用1000μL水溶解，得待测液。待测液稀再稀释12倍测定麻黄碱。3结果及讨论3.1胶束扫集缓冲体系、有机改性剂和SDS浓度的选择本实验利用低p

5、H抑制电渗流，采用磷酸盐体系，考察了体系的pH值(2.00,2.20,2.40和2.60)、有机改性剂的种类(乙腈、甲醇、异丙醇、乙醇)及浓度(10%～25%，V/V)对麻黄碱、可待因和曲马多出峰情况的影响，图1SDS浓度对峰高的影响1.麻黄碱(ephedrine);2.可待因(codeine);3.曲马多(tramadol)。最后选定缓冲体系为20mmol/LNaH2PO4(pH2.20)18%乙腈(V/V)。考察了SDS浓度为20,40,60,80和100mmol/L时3种样品的出峰情况，结果如图

6、1所示，当SDS浓度增加时，峰高增大，出峰时间缩短，这是由于当SDS浓度增大时，被测物的保留因子增大，样品与胶束的作用增强，浓缩到更高的浓度，因而峰高增高，出峰时间略有缩短。但是SDS浓度的增高会导致电流增大，使SDS形成的堆积区宽度增大，引起峰宽增大，峰高减小。本实验在SDS浓度大于80mmol/L时，出现峰高降低的现象，因而SDS的浓度选择为80mmol/L。3.2胶束扫集分离电压考察了负电压为16,18,.freelS/cm时曲马多、麻黄碱和可待因的出峰情况。结果显示，在萃取液电导与电泳分离缓冲液

7、电导一致时，出峰最高(如图2A所示)，这是样品及SDS的电堆积行为和电泳电流共同作用的结果。实验最终选择20mmol/LNaH2PO4乙腈18%(电导6.6mS/cm)为萃取液，此时电泳电流也较稳定。3.4选择性耗尽进样中进样电压、进水柱长度及进样时间的影响考察了进样电压为8,10,12,14,16,18和20kV时的进样效果。结果表明，随进样电压的升高，进样效率增大，但峰宽有所展宽，进样时或随后的分离过程中出现断流的机率增大，为了保证较高的进样成功率，实验选用较低的进样电压10kV。为考察水柱的影响

8、，比较了进水时间为0,20,40,60,90,120s(H=16.0cm)时的出峰情况。结果表明，对于使用正电源进样，进样时间长达数分钟，毛细管进样端经物理修整的情况，进水长度对进样效果的影响并不明显。考虑到简化操作有利于提高实验的稳定性，进样前不引进水柱。考察了进样时间为60,120v150,180,210和240s(U=10kV)时的出峰情况，结果如图2B所示。随进样时间增长峰高呈增高趋势，但峰宽增大，柱效略有下降。当进样时间180s时