rphplc法测定兔血浆中黄芩苷的含量论文

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1、RPHPLC法测定兔血浆中黄芩苷的含量论文【摘要】反相高效液相色谱法；黄芩苷；血药浓度【关键词】反相高效液相色谱法；黄芩苷；血药浓度Abstract:ObjectiveArapidsensitiveRPHPLCmethodinebaicalinintherabbits’plasma.MethodsTherabbits'plasmaonsolTMC18columnobilephaseethanol,.freelL/min,andtheUVdetection.BenzoicacidL(r=09993).Theethodissimple,rapidandsuita

2、bleforthedeterminationofconcentrationofplasmaandthestudyofpharmacokiics.Keya黄芩苷是从唇形科植物黄芩（ScutellariabaicalensisGeorgi）的干燥根提取所得的黄酮类物质，具有抗炎抗变态反应、抗微生物、解热、降压利尿、降血脂血糖、利胆解痉等作用［1～2］。黄芩苷是多种中药制剂的有效成分，因此建立黄芩苷的血药浓度测定方法，具有重要意义。本文在文献［34］基础上，进行测定条件优化，采用RPHPLC法，以苯甲酸为内标物测定家兔血浆中黄芩苷的含量，此方法具有简便、专属性强、准

3、确及应用性强等优点.freelonsolTMC18柱（250mm×4.6mm,ID,5μm）；流动相：甲醇水磷酸（体积比55∶45∶0.2）；流速：1mL/min；检测波长：277nm；柱温：室温；进样量：10μL。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取黄芩苷对照品25mg，置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，即得0.5mg/mL的黄芩苷对照品储备液。分别精密吸取黄芩苷对照品储备液0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL分别置10mL容量瓶中，用重蒸水定容，配成5、25、50、100、150、200、250μg/mL的系列

4、黄芩苷对照品标准溶液。2.2.2血浆样品处理取含有一定量黄芩苷的血浆0.4mL至5mL离心管中，加入重蒸水0.4mL，内标物溶液（0.45mg/L苯甲酸甲醇溶液）0.4mL，乙腈0.8mL，漩涡混合30s，超声振荡5min，于3000r/min的高速离心机上离心10min，取上清液经0.45μm微孔有机滤膜滤过，取续滤液10μL进样，记录色谱图。A.空白血浆；B.空白血浆+20μg/L黄芩苷+90μg/L苯甲酸甲醇溶液；C.血浆样品a.黄芩苷;b.苯甲酸图1样品测定色谱图（略）Fig.1Chromatogramsofratplasmasamples2.3方法的专属

5、性取空白血浆0.4mL，除不加内标物溶液外，按“2.2.2”项下操作，得色谱图1A，将一定浓度的黄芩苷标准液和内标物溶液加入空白血浆中，依法操作，得色谱图1B，待测物黄芩苷与内标苯甲酸的保留时间分别为9.8min和11.7min；取血浆样品，依同法操作，得色谱图1C。结果表明，空白血浆中的内源性物质不干扰待测物黄芩苷及内标物的测定。2.4标准曲线和线性范围取空白血浆0.4mL，加入黄芩苷标准系列溶液0.4mL，配制成相当于黄芩苷血浆质量浓度为1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/mL，除不加入重蒸水0.4mL外，按照“2.2.2”项

6、下依法操作。进样10μL，记录色谱图；以待测物质量浓度为横坐标，待测物与内标物的峰面积比值为纵坐标，用最小二乘法进行回归运算，求得直线回归方程：Y=0085179x-0.00244，r=0.9993，表明黄芩苷质量浓度在1~50μg/mL内呈良好的线性关系，定量下限为0.11μg/mL。2.5精密度与准确度取空白血浆0.4mL按照“2.4”项下方法制备黄芩苷低、中、高3个浓度（5.0，50.0，250.0μg/mL）的样品，每一浓度进行3样本分析，连续测定3d，并与标准曲线同时进行。以当天的标准曲线计算样品的浓度，求得方法的精密度与回收率，结果见表1。表1黄芩苷

7、的准确度和精密度试验结果（略）Tab.1AccuracyandprecisionoftheHPLCdeterminationofbaicalin2.6提取回收率考察取空白血浆0.4mL，按“2.4”项下的方法制备低、中、高3个浓度（5.00，50.0和250.0μg/mL）的样品，每个浓度测定3个样品。同时另取空白血浆0.4mL，除不加重蒸水外，按“2.2.2”项下处理，分取上清液，加入相应浓度的标准溶液0.4mL，混匀，进样分析，获得相应的峰面积。以每一浓度2种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果表明，黄芩苷血浆浓度在5.00，50.0和250.0μg/mL

8、时的提取回