扶正软坚方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响论文

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1、扶正软坚方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响论文季旭明，赵启韬，孙敬昌，杨勇，朱庆均，刘恒，郑广娟【摘要】目的研究扶正软坚方对肺纤维化的干预作用及对MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法ethodsSixtymaleMP-9algroup（P0.05）.FuzhengruanjianprescriptionscouldsignificantlyupgradetheexpressionsofMMP-9anddegradetheexpressionsofTIMP-1inadose-dep

2、endentycin-inducedpulmonaryfibrosisinrats,increasingtheexpressionofMMP-9andsuppressingtheexpressionofTIMP-1shouldbethemechanisms.【Keyonaryfibrosis；matrixmetalloproteinase-9；inhibitiorofmatrixmetalloproteinase-1肺纤维化是多种病因引起的一种慢性炎症性间质性肺疾病，其主要病理改变为弥漫性肺泡炎、肺泡

3、单位结构紊乱和肺纤维化。基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）与肺纤维化发展关系密切，TIMP-1在肺纤维化过程中高表达，成为肺纤维化的标志物之一。笔者以大鼠肺纤维化模型为研究对象，探讨扶正软坚方对肺纤维化的治疗作用及对MMP-9和TIMP-1表达的影响，结果报道如下。1材料与方法1.1实验动物及分组MP-9单克隆抗体、羊抗大鼠TIMP-1单克隆抗体、兔抗羊FITC-IgG、羊抗小鼠FITC-IgG均购自北京中彬生物技术有限公司。1.3肺纤维化模型制备参照文献方法用

4、博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型［1］，腹腔注射水合氯醛（300mg/kg）麻醉大鼠，仰卧固定，常规消毒，颈正中切开皮肤，钝性分离气管，于气管软骨环间隙用1ml注射器缓慢注入博莱霉素（5mg/kg）0.2～0.3ml，立即将大鼠直立旋转，使肺内药物分布均匀，空白组以同样方法气管内注入等量生理盐水。1.4给药方法于造模后第2天开始用药，大剂量组按照24g/（kg·d），小剂量组按照12g/（kg·d），空白组、模型组灌服生理盐水，各组蒸馏水稀释等体积灌胃，每天1次，给药至实验第28天。每周复查动物体重以调整

5、给药剂量。1.5指标测定1.5.1免疫荧光+激光共聚焦显微镜检测MMP-9和TIMP-1表达采用免疫组织荧光法，抗体效价为1：100。石蜡切片脱蜡，正常血清封闭，一抗4℃过夜，0.1MPBS（pH7.4）冲洗。二抗37℃孵育20min，0.1MPBS（pH7.4）冲洗，ZeissLSM510激光共聚焦显微镜检测。ZeissLSM510ImageExaminer图像分析软件半定量分析图像相对荧光强度，蛋白表达量以相对荧光强度表示。1.5.2肺组织病理学检查取肺组织用甲醛固定，7天后进行包埋、切片，病理切

6、片按常规方法进行HE染色。1.6统计学方法实验数据应用SPSS10.5统计软件处理，数据用x±s表示。2结果2.1扶正软坚方对肺纤维化大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响与空白组比较，模型组MMP-9表达明显降低（P0.05）,TIMP-1表达明显增强（P0.01），差异有显著性；扶正软坚方能明显增强MMP-9的表达（P0.05），明显降低TIMP-1的表达（P0.05），差异有显著性。见表1。2.2病理组织学检测2.2.1肉眼观察空白组双肺呈粉红色，表面光滑。模型组第28天双肺体积缩小，硬度

7、增加。扶正软坚大、小剂量组肺表面颜色略暗，硬度低于模型组，双肺体积缩小较模型组轻，其中以大剂量组硬化程度最轻。表1扶正软坚方对肺纤维化大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响（略）注：与空白组比较，*P0.05，**P0.01；与模型组比较，△P0.05，△△P0.012.2.2光镜观察正常组大鼠的肺支气管、终末性细支气管结构正常。模型组表现为肺泡壁成纤维细胞的增生，Ⅱ型上皮细胞增生，伴有大量胶原沉积；肺组织呈蜂窝状，局部肺实变。中药大、小剂量组第28天纤维化病灶较模型组减少，纤维化程度较轻，其中

8、以大剂量组病变减轻程度最为明显。3讨论在中医传统著述中，没有与肺间质纤维化完全相应的病名。根据本病的临床表现，一般将其列入“咳嗽”、“肺胀”或“短气”等门中。认为其病机多属本虚标实，肺脾气阴亏虚为本，痰浊、瘀血、热毒为标，治当益气活血，化痰散结，兼以清泻肺热。以此治法处方组成扶正软坚方，方中黄芪补脾益肺，白术健脾益气，当归活血化瘀，昆布化痰软坚，黄芩清泻肺热，麦冬滋补肺阴，诸药相合，共奏益气活血，化痰散结，清泻肺热之效。且现代临床研究发现以上诸药单味制剂