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《清热燥湿方对急性肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶2及其抑制因子基因表达的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、清热燥湿方对急性肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶2及其抑制因子基因表达的影响论文.freelRNA表达。结果与模型组相比,4h清热燥湿方组MMP-2mRNA表达明显降低(P0.01),TIMP-2蛋白染色阳性面积率及TIMP-2mRNA表达均显著增高(P0.01或P0.05);8h清热燥湿方组MMP-2蛋白染色阳性面积率及MMP-2mRNA表达显著降低(P0.01或P0.05)。病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,清热燥湿方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论清热燥湿方能减轻LPS致ALI大鼠肺组织损伤
2、,.freelRNA(MMP-2mRNA),tissueinhibitorofMMP-2anditsmRNA(TIMP-2mRNA)intheratsaleMP-2andTIMP-2easuredbyimmunohistochemistryABC,andtheirmRNAseasuredbyreal-timefluorescentPCR,icroscope.ResultsIn4hQingrezaoshidecoctiongroup,theexpressionofMMP-2mRNARNAodelgroup(P0.01orP0
3、.05).In8hQingrezaoshidecoctiongroup,theexpressionofMMP-2proteinanditsmRNAonaryhemorrhageandnecrosisodelgroupandabetterconditioninQingrezaoshidecoctiongroup.ConclusionQingrezaoshidecoctionmayabatethehistopathologyofthelunginjuryandithasprotectiveeffectsonendotoxin-
4、inducedALIinrats.KeyRNA表达的影响,旨在寻求治疗ALI的有效方法并初步探讨其作用机制。1材料与方法1.1动物清洁级MP-2和TIMP-2免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠MMP-2、TIMP-2和GAPDH引物和探针序列由广州达辉生物技术有限公司合成。MMP-2上游引物：5’-CCCATGAAGCCTTGTTTACCA-3’,下游引物：5’-TGGAAGCGGAACGGAAACT-3’,探针序列：5’-TGGCAATGCTGATGGACAGCC–3’,5’端FAM修饰,3’端Tamra
5、修饰;TIMP-2上游引物：5’-CTCATCGCGGGCCGTTTAAG-3,下游引物：5’-GAAGGCTTCGGGTCATCGAG-3’,探针序列：5’-CATGGAGAGCCTCTGTGGAT-3’,5’端FAM修饰,3’端Tamra修饰;GAPDH上游引物：5’-CCGAGGGCCCACTAAAGG-3,下游引物：5’-GCTGTTGAAGTCACAGGAGACAA-3,探针序列：5’-CATCCTGGGCTACACTGAGGACCA-3,5’端FAM修饰,3’端Tamra修饰。Trizol总RNA提取试剂、反转
6、录和PCR扩增所需的酶及其他试剂均购自美国Invitrogen公司。清热燥湿方由厚朴、草果、黄芩、柴胡等中药按一定比例组成,浓缩成1g原药材/mL的水煎液,高温高压灭菌,4℃冷藏备用。中药饮片均购自上海曙光医院东院,地塞米松片购自上海医药有限公司信谊制药总厂。1.3分组、造模及给药大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、地塞米松组(C组)、清热燥湿方组(D组)。每组再分为4h和8h2个亚组。除正常对照组外,其余各组大鼠均经尾静脉注射10mg/kg的细菌脂多糖(LPS)复制ALI模型,其中C组、D组在造模前以相应药液
7、灌胃3d,2次/d,第3日灌胃后3h,经尾静脉注入LPS(10mg/kg)。A组和B组在相应的时间点给予等体积的蒸馏水,各组动物用药量按人与动物的体表面积换算,地塞米松灌胃量为0.45mg/kg,清热燥湿方灌胃量为6.48g原药材/kg。所有动物均于设定的相应时相点,用25%乌拉坦1.0g/kg腹腔麻醉,开胸分离右肺上叶,10%甲醛溶液固定,用于病理检测及肺组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达检测;右肺下叶置于液氮罐中作MMP-2mRNA和TIMP-2mRNA表达检测。1.4观察指标及检测方法1.4.1免疫组织化学ABC法
8、检测采用IMS细胞图像分析系统医学图像分析软件,对免疫组织化学结果进行图像采集和定量分析。每张切片在高倍镜下随机选择不相重叠的3个视野,细胞核为蓝色,MMP-2和TIMP-2阳性细胞为棕黄色。计算出每例样本的蛋白染色阳性面积率(蛋白染色阳性面积率=阳性细胞面积/总面积)作为比较参数。1.4.2实时荧光定
