扶正软坚方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响

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1、扶正软坚方对肺纤维化大鼠基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的影响季旭明，赵启韬，孙敬昌，杨勇，朱庆均，刘恒，郑广娟【摘要】目的研究扶正软坚方对肺纤维化的干预作用及对MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法MP-9和TIMP-1的表达，并进行半定量分析。结果与空白组比较，模型组MMP-9表达明显降低（P0.05）,TIMP-1表达明显增强（P0.01）；扶正软坚方各组能明显增强MMP-9的表达（P0.05），明显降低TIMP-1的表达（P0.01）。结论扶正软坚方能减轻博来霉素诱导的大鼠肺纤维化，作用机制可能是通过增强MMP-9蛋白表达，抑制TIM

2、P-1蛋白表达实现。【关键词】扶正软坚方；肺纤维化；基质金属蛋白酶-9；基质金属蛋白酶抑制剂-1【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectofFuzhengruanjianprescriptionsonpulmonaryfibrosisinratsanditspossiblemechanism.MethodsSixtymaleMP-9algroup（P0.05）.FuzhengruanjianprescriptionscouldsignificantlyupgradetheexpressionsofMMP-9and

3、degradetheexpressionsofTIMP-1inadose-dependentycin-inducedpulmonaryfibrosisinrats,increasingtheexpressionofMMP-9andsuppressingtheexpressionofTIMP-1shouldbethemechanisms.【Keyonaryfibrosis；matrixmetalloproteinase-9；inhibitiorofmatrixmetalloproteinase-1肺纤维化是多种病因引起的一种慢性炎症性间质性肺疾

4、病，其主要病理改变为弥漫性肺泡炎、肺泡单位结构紊乱和肺纤维化。基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）与肺纤维化发展关系密切，TIMP-1在肺纤维化过程中高表达，成为肺纤维化的标志物之一。笔者以大鼠肺纤维化模型为研究对象，探讨扶正软坚方对肺纤维化的治疗作用及对MMP-9和TIMP-1表达的影响，结果报道如下。1材料与方法1.1实验动物及分组MP-9单克隆抗体、羊抗大鼠TIMP-1单克隆抗体、兔抗羊FITC-IgG、羊抗小鼠FITC-IgG均购自北京中彬生物技术有限公司。1.3肺纤维化模型制备参照文献方法用博莱

5、霉素复制大鼠肺纤维化模型〔1〕，腹腔注射水合氯醛（300mg/kg）麻醉大鼠，仰卧固定，常规消毒，颈正中切开皮肤，钝性分离气管，于气管软骨环间隙用1ml注射器缓慢注入博莱霉素（5mg/kg）0.2～0.3ml，立即将大鼠直立旋转，使肺内药物分布均匀，空白组以同样方法气管内注入等量生理盐水。1.4给药方法于造模后第2天开始用药，大剂量组按照24g/（kg·d），小剂量组按照12g/（kg·d），空白组、模型组灌服生理盐水，各组蒸馏水稀释等体积灌胃，每天1次，给药至实验第28天。每周复查动物体重以调整给药剂量。1.5指标测定1.5.1免疫荧光+激

6、光共聚焦显微镜检测MMP-9和TIMP-1表达采用免疫组织荧光法，抗体效价为1：100。石蜡切片脱蜡，正常血清封闭，一抗4℃过夜，0.1MPBS（pH7.4）冲洗。二抗37℃孵育20min，0.1MPBS（pH7.4）冲洗，ZeissLSM510激光共聚焦显微镜检测。ZeissLSM510ImageExaminer图像分析软件半定量分析图像相对荧光强度，蛋白表达量以相对荧光强度表示。1.5.2肺组织病理学检查取肺组织用甲醛固定，7天后进行包埋、切片，病理切片按常规方法进行HE染色。1.6统计学方法实验数据应用SPSS10.5统计软件处理，数据

7、用x±s表示。2结果2.1扶正软坚方对肺纤维化大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响与空白组比较，模型组MMP-9表达明显降低（P0.05）,TIMP-1表达明显增强（P0.01），差异有显著性；扶正软坚方能明显增强MMP-9的表达（P0.05），明显降低TIMP-1的表达（P0.05），差异有显著性。见表1。2.2病理组织学检测2.2.1肉眼观察空白组双肺呈粉红色，表面光滑。模型组第28天双肺体积缩小，硬度增加。扶正软坚大、小剂量组肺表面颜色略暗，硬度低于模型组，双肺体积缩小较模型组轻，其中以大剂量组硬化程度最轻。表1扶正软坚方对肺纤

8、维化大鼠肺组织MMP-9和TIMP-1表达的影响（略）注：与空白组比较，*P0.05，**P0.01；与模型组比较，△P0.05，△△P0.012.2.2光镜观察正