高效毛细管电泳法同时分离测定苏丹红ⅰ、ⅱ号论文

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1、高效毛细管电泳法同时分离测定苏丹红Ⅰ、Ⅱ号论文邓光辉，张桂华，陈盛余【摘要】目的采用高效毛细管电泳法（HPCE）同时分离及测定苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ。方法利用非涂层弹性融硅石英毛细管75μm（I.D.）×60cm为分离通道，优化选择检测波长、缓冲溶液种类、浓度及pH值、运行电压、进样浓度、进样时间等试验参数后进行分离测定。结果在最佳实验条件下：紫外检测波长297nm,30mmol/LTris(pH=9.5)缓冲溶液，分离电压15kV,进样时间20s，较好地实现了苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ的基线分离及检测。结论该法简便、快速、灵敏度高。【关

2、键词】高效毛细管电泳法；苏丹红Ⅰ；苏丹红Ⅱ苏丹红Ⅰ～Ⅳ是一种人工合成的偶氮类、脂溶性的化工染色剂，其中苏丹红Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ均为苏丹红I的化学衍生物。苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ结构式如图1所示［1］。苏丹红作为一种工业染料.freel（I.D.）×55cm(河北永年光纤厂)；KQ520DB型超声波清洗器;1810型石英自动双重纯水蒸馏器（江苏省宜兴市石英玻璃仪器厂）。1.2试剂辣椒粉（广西南宁）；苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ（97%，AJohsonMattheypany）；三（羟甲基）氨基甲烷(Tris，国药集团化学试剂有限公司，B.R.)；硼酸(G

3、B)（A.R.中国上海试剂总厂）；其他为分析纯试剂；水为实验室自备二次蒸馏水。2方法分别准确称量0.0005g苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ，甲醇溶解后再分别定容至10.00ml，配制成50.0mg/L的苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ的单标储备液；分别准确称取0.0005g苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ于同一烧杯中，甲醇溶解后定容至10.00ml，配制成50.0mg/L的苏丹红Ⅰ和苏丹红Ⅱ的混合储备液。取干燥辣椒粉末，准确称量1.0000g加30.0ml甲醇，超声波提取30min,冷却后减压抽滤，取滤液用甲醇定容至50.00ml，摇匀，作为供试液。避光保存于冰箱

4、中待用。所有溶液进样前先用0.45μm微孔滤膜过滤。3结果与讨论3.1检测波长的选择采用紫外-可见分光光度计分别对苏丹红Ⅰ、Ⅱ号的甲醇溶液进行扫描，得到苏丹红Ⅰ、Ⅱ的最大紫外吸收波长都为228nm。本实验探究了216，228，254，297，332，478，491nm等7个检测波长，结果显示在297nm的检测波长下苏丹红Ⅰ、Ⅱ的分离效果较好，因此选用297nm作为分离检测波长。3.2缓冲体系的选择实验探讨了硼砂-硼酸，Tris-Cit,Tris-硼酸，Tris-NaH2PO4，磷酸盐等缓冲体系对分离的影响。结果表明Tris-硼

5、酸体系能够得到较好的分离效果。3.3pH值的影响pH值是影响分离度的一个重要因素。在30.0mmol/LTris中分别加入硼酸调节pH值为8.00，8.50，9.00，9.50，10.00的缓冲体系。结果显示采用pH值为9.50的30mmol/L的Tris-硼酸缓冲体系能获得较好的分离。3.4缓冲溶液浓度的选择增加缓冲溶液的浓度，离子浓度增大，改变缓冲容量，减少溶质和管壁之间物质的作用，从而改善分离效果。缓冲溶液的浓度过大将产生大量的焦耳热，导致基线不稳，峰形变差。试验探讨了10.0，20.0，30.0，40，50，60mmo

6、l/L这几个浓度的缓冲溶液对分离检测的影响，结果表明30mmol/LTris（pH=9.50）分离效果较好。3.5运行电压的选择分离电压的大小不仅影响被测化合物的迁移时间，而且对分离度也有影响。高分离电压可以改善分离度，缩短分析时间。但是电压过高，毛细管内产生的焦耳热不容易散发，将引起柱效和分离度的降低，电压过低则分离时间过长。试验探讨了12，15，18，21，24kV5个运行电压，结果表明15kV分离效果最佳。3.6进样时间的选择进样时间决定了进样量的大小。进样量太小，达不到检测器的灵敏度；进样量太大，样品塞长度超过扩散引起

7、的区带增宽，使分离效率和分离度变差。实验采取重力进样,探讨了10，15，20，25，30s5种进样时间,结果表明，20s为最佳进样时间。3.7标准曲线及重现性精确配制不同浓度的苏丹红Ⅰ号标准样品溶液，以30mmol/LTris+硼酸为缓冲溶液，运行电压为15kV，pH=9.50，进样时间20s，检测波长为297nm。以峰面积（μV/s）与质量浓度(mg/L)绘制标准工作曲线图，得到线性回归方程为Y=17311X+20371，r=0.9994，线性范围为0.05～4mg/L，检出限为0.05μg/ml。同法绘制苏丹红Ⅱ的标准工作

8、曲线图，得到线性回归方程为Y=8261.1X-78353，r=0.9996，浓度在20.00～50.00mg/L范围有良好的线性关系，检出限为20.00μg/ml。3.8样品分析优化条件下，利用加标法，分别比较确认苏丹红Ⅰ、Ⅱ号的电泳图，以达到对苏丹红Ⅰ、Ⅱ号的定性分析目的。