高效毛细管电泳法同时测定复方鞣酸涂膜剂中四组份含

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1、高效毛细管电泳法同时测定复方鞣酸涂膜剂中四组份含【关键词】水杨酸；苯甲酸；电泳，毛细管；复方鞣酸涂膜剂；间苯二酚；苯酚复方鞣酸涂膜剂是由鞣酸、间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚、聚乙烯醇124、甘油、乙醇等组成的皮肤科外用制剂，可抑制真菌生长、止痒，用于脚癣、甲癣、体癣、股癣及神经性皮炎。原质量标准未列含量测定项［1］。含间苯二酚、苯酚、水杨酸、苯甲酸的复方制剂的含量测定，文献报道集中在高效液相色谱法（HPLC）法和计算分光光度法［2~9］。毛细管电泳以其高效、快速、运行成本低廉以及环境友好等优势，在药物分析中得到了广泛应用。为了有效控制复方鞣酸涂膜

2、剂的质量，2005年10月~2006年2月，建立了高效毛细管电泳（HPCE）法同时测定复方鞣酸涂膜剂中间苯二酚、水杨酸、苯甲酸和苯酚含量的方法，操作简便、快速、准确，可用于该制剂的质量控制。1仪器与试剂HPCE-10型高效毛细管电泳仪，JS-3050UV色谱工作站(均为大连江申分离科学技术公司产品)；BS224S型电子天平(Sartorius)；SYZ-C型石英亚沸高纯水蒸溜器(金坛市晶玻实验仪器厂)；AS2060B型超声波清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)；pHS-2型精密酸度计(上海雷磁仪器厂)；未涂层弹性石英毛细管45cm×75μmID，

3、有效长度38cm(河北永年锐沣色谱器材有限公司)；鞣酸(AR，遵义市第二化工厂)；间苯二酚(AR，湖南南方化工厂试剂公司)；水杨酸(AR，天津市科密欧化学试剂开发中心)；苯甲酸(药用，镇江前化工厂)；苯酚(AR，广东西陇化工厂)；对氨基苯甲酸(AR，上海五联化工厂)；复方鞣酸涂膜剂(本院配制)；其余为药用辅料。水为石英亚沸水。2方法与结果2.1电泳条件及系统适用性试验检测波长200nm，重力进样10cm×20s，运行电压12KV。运行缓冲液为30mmol/L硼砂溶液(NaOH调至pH10.0)。实验前，用0.1mol/LNaOH溶液填充毛细管30

4、min，再依次用水、0.1mol/LHCl；水、0.1mol/LNaOH；水及运行缓冲液冲洗5min，2次实验之间用运行缓冲液冲洗毛细管5min。所有溶液使用前均超声脱气并经0.45μm微孔滤膜过滤。实验在室温进行。在该电泳条件下，样品中间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚及内标对氨基苯甲酸的保留时间分别为7.299、12.241、11.368、5.789、9.662min，电泳结果见图1。2.2标准曲线与线性范围精密称取间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚、对氨基苯甲酸适量，用水溶解，分别配成浓度约为1000mg/L的对照溶液。分别精密吸取各对照贮备液0.

5、05、0.1、0.2、0.8、1.2、1.6ml置10ml量瓶中，用运行缓冲液定容，进样测定，测量峰面积值。对照品与内标峰面积比值Y与各对照溶液的浓度X(mg/L)之间呈良好的线性关系。回归方程和线性范围：间苯二酚：Y1=0.0126X1+0.003，γ1=0.9990；水杨酸：Y2=0.021X2+0.0465，γ2=0.9976；苯甲酸：Y3=0.0103X3-0.0014，γ3=0.9992；苯酚：Y4=0.0066X4+0.0101，γ4=0.9994。线性范围均为5～160mg/L。2.3精密度实验精密吸取各对照品储备液0.8ml置10

6、ml量瓶中，按“2.2”项下操作进行电泳分析。根据测出的四组分含量，求得间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚的日内和日间RSD分别为2.21%、2.94%；1.37%、1.70%；1.48%、1.64%；3.48%、3.92%(n=5)。2.4回收率实验按处方比例称取辅料，精密配制含间苯二酚、水杨酸、苯甲酸、苯酚各为标示量80%、100%、120%的模拟样品3份，按“2.5”项下方法测定,计算回收率。结果见表1。2.5样品测定称取复方鞣酸涂膜剂1g，精密称定，置烧杯中，缓慢加入已预热至60℃的乙醇适量，置60℃水浴搅拌使溶，移入100ml量瓶，放至室温

7、，加乙醇定容。精密量取1ml，置于10ml量瓶中，用运行缓冲液定容。进样测定，结果见表2。表1回收率测定结果（n=3）表2样品含量测定结果　　3讨论3.1内标物的选择为提高定量分析的精密度，采用内标法。内标对氨基苯甲酸在进样溶液中浓度为80mg/L。3.2运行缓冲液pH值的影响考察了30mmol/L硼砂缓冲液中不同pH值（pH8.5～11.0）对分离的影响。实验表明pH9.5～10.5，四组分和内标均能实现基线分离，但是随着pH的增加，缓冲液的运行电流增大，焦耳热增加，于分离不利故选择pH10.0。3.3运行缓冲液浓度的影响考察了10～50mmo

8、l/L硼砂缓冲液（pH10.0）对分离的影响。实验中发现，随着缓冲液浓度升高，各组分和内标之间的分离度增加，迁移时间延长。这是由于增加离