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1、腹透液相关浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞周期蛋白的影响及葛根素的拮抗作用论文【摘要】目的研究腹透液相关浓度葡萄糖（1.5％、2.5％）对人腹膜间皮细胞周期和周期蛋白p21的影响及葛根素的拮抗作用。方法人腹膜间皮细胞在含糖（1.5％、2.5％）、含糖含葛根素(葛根素终浓度为100mg/L)的无血清培养基中培养24h后,用流式细胞仪分析细胞周期,C)andprotectionofpuerarin.MethodsHPMCsfreeRPMI1640mediumcontainingglucoseofdifferentconcentrations(1.5%and2.5%)andpuerarin(100mg/L
2、)for24hours.Thecellcycledistributionetry.Theexpressionofp21ostofthecellsbecamehypertrophic,andulatedexpressionofp21,berofthecellsarrestedinG1andp21expressionsdecreasedingroupsofpuerarin.ConclusionHighglucosestimulatedtheexpressionofp21,ightberelatedtothehypertrophyandarrestintheG1phaseofmesothelialc
3、ellsbyhighglucose.Puerarinmightantagonizetheeffectofhighglucoseofthecyclesofmesothelialcellsandtheircyclin.Keyesothelialcells;glucose;cyclin;puerarin腹膜纤维化所致的腹膜功能衰竭是腹膜透析应用受限的主要原因。研究发现高糖可使间皮细胞肥大,间皮细胞层受损或缺失,导致腹膜纤维化和功能丧失［1］,有效保护腹膜间皮细胞能延缓腹膜纤维化。细胞周期调控蛋白p21过度表达与细胞肥大有关［2-3］。葛根素能拮抗腹膜透析液对腹膜间皮细胞的损伤,发挥抗纤维化作用［4］
4、。本实验观察高浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞周期和p21蛋白的影响及葛根素的拮抗作用,.freelg/L)的培养基中培养24h，在倒置显微镜下观察细胞形态。实验分对照组（不含糖不含葛根素）、含糖1.5％组、含糖2.5％组及葛根素组、含葛根素含糖1.5％组、含葛根素含糖2.5％组6组。1.2.3流式细胞仪分析各组间皮细胞的周期分布腹膜间皮细胞在不同条件培养基中培养24h后用PBS液洗2次，胰酶消化，70%乙醇固定后，重悬于PBS液中。加入RNA酶50mg/L,避光30min离心去上清液。碘化吡啶于暗处染色30min后，用流式细胞仪检测.freelin后进行10%、15%的SDS-PAGE电泳，采用电
5、转印法将凝胶上的蛋白转移至硝酸纤维素膜，膜在室温封闭4h，加1∶100抗p21抗体，4℃过夜，后加二抗室温作用1h，洗膜后显色。1.3统计学处理数据采用±s表示，用SPSS12．0统计软件对所得数据进行分析，各组腹膜间皮细胞p21表达的比较采用单因素方差分析，P0.05表示存在显著性差异。2结果2.1各组人腹膜间皮细胞周期的比较对照组培养24h的间皮细胞中G1期细胞比例为（62.5±3.3）%,而含糖1.5％组和含糖2.5％组G1期细胞比例增高,分别为（72.1±3.54）%和（72.5±3.4）%，与对照组有显著性差异(P0.05)，含糖2.5％组和含糖1.5％组无显著性差异（P＞0.05）
6、。含葛根素含糖1.5％组和含葛根素含糖2.5％组G1期细胞比例分别为（64.7±4.5）%和（65.6±4.3）%,与对照组之间无显著性差异（P＞0.05）。2.2各组人腹膜间皮细胞p21的表达图1可见，对照组腹膜间皮细胞p21表达少,含糖1.5％组和含糖2.5％组与对照组比较p21表达增多（P＜0.05）,其中含糖2.5％组与含糖1.5％组无显著性差异（P＞0.05）。含葛根素含糖组较相应浓度含糖组p21表达减少（P0.05）。3讨论腹膜透析作为有效的肾脏替代治疗方法已经被越来越多的尿毒症患者所接受,腹膜发生纤维化导致腹膜功能衰竭是患者退出治疗的主要原因之一。含糖的腹膜透析液具有明显的生物不
7、相容性,其导致腹膜间皮细胞损伤被认为是腹膜纤维化的关键因素［6］。有效保护腹膜间皮细胞可明显延缓腹膜纤维化的进程。在长期腹膜透析过程中腹膜间皮细胞可因持续暴露于高糖腹膜透析液中而出现细胞肥大、细胞分裂停滞等表现。在本实验中我们也发现高浓度葡萄糖促使间皮细胞停滞于细胞周期的G1期。目前认为细胞肥大可能是由于细胞受细胞内外信号刺激后进入G1期时,DNA合成被抑制，同时蛋白和RNA合成增加,细胞生长停滞
