hplc法测定噻康唑的含量和有关物质论文

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1、HPLC法测定噻康唑的含量和有关物质论文【摘要】目的采用高效液相色谱法测定噻康唑的含量及有关物质。方法采用ODSC18色谱柱：SpherisobC18(4.6mm×250mm，5μm)；保护柱(4mm×10cm)，以［甲醇∶乙腈(70∶30)］∶0.05mol/L含有0.025mol/L1硫辛酸的磷酸三乙胺缓冲液(58∶42，V/V)为流动相(用磷酸调pH至4.0)，流速1.5ml/min，紫外检测波长260nm。结果HPLC法测定的线性范围为0.12～0.28mg/ml，r=0.9994，最低检测限为20ng；样品溶液

2、在24h内稳定.freelinationofthecontentandtherelatedsubstancesoftioconazolebyHPLCABSTRACTObjectiveTodeterminethecontentandtherelatedsubstancesoftioconazolebyHPLC.MethodThecolumn:ODSC18column(SpherisobC18(4.6mm×250mm,5μm);protectcolumn(4mm×10cm);themobilephase:［methanol∶a

3、cetonitrile(70∶30)］triethyaminephosphatebuffer(0.05mol/L)containing1octanesulphonicacid(0.025mol/L)andadjustedtopH4l/min;thecontentoftioconazoleanditsrelatedsubstancesunderthesamecondition.ResultsThelinerdetectionrangeofthedeterminationbyHPLCis0.12～0.28mg/ml;thec

4、orrelationcoeffientis0.9994;thedetectionlimitis20ng;thesamplesolutionisstableethodisfacileandaccuratetodeterminethecontentandrelatedsubstancesoftioconazole.KEYilipore水纯化系统所制。2色谱条件色谱柱：(SpherisobC18(4.6mm×250mm，5μm)；保护柱(4mm×10cm)；流动相：［甲醇∶乙腈(70∶30)］∶0.05mol/L含有0.025m

5、ol/L1硫辛酸的磷酸三乙胺缓冲液(58∶42，V/V)(用磷酸调pH至4.0)；柱温40℃；流速1.5ml/min；检测波长260nm；进样体积20μl。3测定方法3.1含量测定对照品溶液取噻康唑对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每ml中含0.2mg的溶液。供试品溶液取本品约100mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，混匀。取10ml此溶液置50ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。3.2有关物质测定对照品溶液杂质A、B、C、D各取1mg精密称定，置25ml容量瓶中，加甲醇15ml，溶解后加至

6、刻度。供试品溶液取本品100mg，置25ml容量瓶中，加15ml甲醇，振摇使溶解，再加甲醇至刻度。4结果与讨论4.1方法的专属性通过对噻康唑主产物、溶剂、合成中间体及降解产物进行HPLC分离检测，结果表明采用HPLC法测定噻康唑的含量及有关物质的方法专属性良好(图1)。采用USP28NF23该品种有关物质检查方法，杂质B、C分离度不佳，未达到相关要求(图2)。4.2系统适用性试验取本品20mg，置100ml容量瓶中，加甲醇至刻度，制备成供试品溶液，进样20μl，记录色谱图，计算可得噻康唑的理论塔板数为2236，噻康唑峰与

7、杂质分离度为2.4。4.3标准曲线的建立精密称取噻康唑对照品100mg，置100ml容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取6.0、8.0、10.0、12.0和14.0ml分别置于50ml容量瓶中，用甲醇定容。取上述溶液在选定的色谱条件下，进样20μl，记录色谱图，根据峰面积计算，以3次测定的峰面积平均值做线性回归，得回归方程为：A=7×107C+193858r=0.9994表明在0.12～0.28mg/ml的范围内峰面积与测定浓度呈良好的线性关系。4.4方法的精密度取浓度为0.2mg/ml的噻康唑对照品溶液20

8、μl注入液相色谱仪，连续进样5次，噻康唑峰面积的RSD为0.11%(n=5)。取同一批供试品，配成6份溶液，分别进样分析，含量测定结果的RSD为0.66%(n=6)。4.5方法的准确度精密称取噻康唑对照品，按照浓度的80%、100%和120%配制供试品溶液，每个浓度配制3份，精密量取20μl注入液相色谱