原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤caspase3和caspase9活性的影响

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1、原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase3和Caspase9活性的影响作者：李浩，石胜良，吴岚，毕桂南【摘要】　　目的探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注损伤大鼠Caspase3和Caspase9活性的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组，线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。采用四肽酶底物法检测脑缺血90min再灌注24h大鼠Caspase3和Caspase9活性，进行神经症状评分，2，3，5－三苯基氯化四氮唑（TTC）染色和HE染色观

2、察脑梗塞体积及病理形态学变化。结果脑缺血再灌注24h，缺血再灌注组Caspase3和Caspase9活性增加，与假手术组比较，差异具有显著性（均P<0.05）；与缺血再灌注组比较，PC高、低剂量治疗组均显著减少Caspase3和Caspase9活性，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P<0.05）。PC高、低剂量治疗组神经功能缺失评分较缺血再灌注组降低（P<0.05）。PC高、低剂量治疗组脑梗死体积较缺血再灌注组减小，高、低剂量组之间差异具有显著性（P<0.05）。PC高、低剂量治疗组

3、脑组织缺血损伤病理学改变明显轻于缺血再灌注组，PC高剂量治疗组缺血改变亦轻于低剂量治疗组。结论PC对缺血再灌注脑损伤具有保护作用，其机制可能与减少Caspase3和Caspase9活性，抗凋亡有关。【关键词】缺血再灌注　Caspase3　Caspase9　原花青素　　　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofprocyanidinontheactivitiesofCaspase-3andCaspase-9aftercerebralischemicreperfusion（I/R

4、）injuryinrats.MethodsInthisexperiment,ratslydividedinto4groups:shamoperatedgroup,I/Rgroup,loiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)modeladebysuture-occludedmethod.After90minMCAOfollooperatedgroup,theactivitiesofCaspase-3andCaspase-9icterritory(P<0.05).paredeallev

5、iatedthepothologicalchangesofbraintissue.ConclusionProcyanidinplaysprotectiveeffectoncerebralischemiainjurybydecreasingtheactivitiesofCaspase-3andCaspase-9,andthendecreasingneuronalapoptosis.　　Keyia-reperfusion;Caspase-3；Caspase-9;Procyanidin脑缺血再灌注损伤的诸多机制中，凋亡机制

6、是重要一环。原花青素（procyanidin，PC）是一类植物和食品中广泛存在的多酚化合物的总称，由不同数量的儿茶素和表儿茶素缩和而成，其含大量活性酚羟基使其具有很强的抗氧化及清除各种活性氧自由基的能力［1］。黄晓瑾等［2］给予缺血再灌注大鼠PC治疗，显示PC对缺血再灌注脑损伤有保护作用，但是否对缺血再灌注脑损伤细胞凋亡有影响尚未见报道。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究PC对大鼠脑缺血再灌注损伤凋亡基因Caspase-3和Caspase-9活性影响，探讨其保护作用的可能分子生物学机制。　　1材料　　1.1动

7、物分组健康C10μl(美国Livermore公司),加入HEPES缓冲液至1ml,37℃孵育1h。用荧光分光光度计在激发波长380nm,释放波长460nm处测定样本荧光强度,间接反应Caspase-3活性。同理取脑组织匀浆100μl和Caspase-9底物AC-LEHD-AFC10μl(美国Livermore公司)加入HEPES缓冲液至1ml,37℃孵育1h;使用荧光分光光度计在激发波长400nm及发射波长505nm时测定其荧光强度即可间接反应Caspase-9活性（各组参照值为未加脑组织时的荧光强度)。　　2.3T

8、TC染色再灌注24h，各组取5只大鼠深麻后开颅取脑。将鼠脑置于-4℃冰箱20min后，将其切成5等份冠状位切片，置于2%TTC溶液中，水浴、多聚甲醛液固定。用计算机病理图像分析仪及梯形法计算出梗塞灶体积，各脑片梗塞灶体积之和即为梗塞体积。左侧大脑半球梗塞灶区呈白色，主要为额顶部皮质和尾壳核，正常组织呈红色。部分组织表现为由白色向红色过度区。