原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤caspase3和caspase9活性的影响论文

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1、原花青素对大鼠脑缺血再灌注损伤Caspase3和Caspase9活性的影响论文李浩，石胜良，吴岚，毕桂南【摘要】目的探讨原花青素(procyanidin,PC)对脑缺血再灌注损伤大鼠Caspase3和Caspase9活性的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、PC低剂量治疗组和PC高剂量治疗组，线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。采用四肽酶底物法检测脑缺血90min再灌注24h大鼠Caspase3和Caspase9活性，进行神经症状评分，2，3.freelicreperfusion（I/R）i

2、njuryinrats.MethodsInthisexperiment,ratslydividedinto4groups:shamoperatedgroup,I/Rgroup,loiddlecerebralarteryocclusion(MCAO)modeladebysuture-occludedmethod.After90minMCAOfollooperatedgroup,theactivitiesofCaspase-3andCaspase-9icterritory(P0.05).paredealleviate

3、dthepothologicalchangesofbraintissue.ConclusionProcyanidinplaysprotectiveeffectoncerebralischemiainjurybydecreasingtheactivitiesofCaspase-3andCaspase-9,andthendecreasingneuronalapoptosis.Keyia-reperfusion;Caspase-3；Caspase-9;Procyanidin脑缺血再灌注损伤的诸多机制中，凋亡机制是重要一

4、环。原花青素（procyanidin，PC）是一类植物和食品中广泛存在的多酚化合物的总称，由不同数量的儿茶素和表儿茶素缩和而成，其含大量活性酚羟基使其具有很强的抗氧化及清除各种活性氧自由基的能力［1］。黄晓瑾等［2］给予缺血再灌注大鼠PC治疗，显示PC对缺血再灌注脑损伤有保护作用，但是否对缺血再灌注脑损伤细胞凋亡有影响尚未见报道。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究PC对大鼠脑缺血再灌注损伤凋亡基因Caspase-3和Caspase-9活性影响，探讨其保护作用的可能分子生物学机制。1材料1.1动物分组健康C

5、10μl(美国Livermore公司),加入HEPES缓冲液至1ml,.freel,释放波长460nm处测定样本荧光强度,间接反应Caspase-3活性。同理取脑组织匀浆100μl和Caspase-9底物AC-LEHD-AFC10μl(美国Livermore公司)加入HEPES缓冲液至1ml,37℃孵育1h;使用荧光分光光度计在激发波长400nm及发射波长505nm时测定其荧光强度即可间接反应Caspase-9活性（各组参照值为未加脑组织时的荧光强度)。2.3TTC染色再灌注24h，各组取5只大鼠深麻后开颅取脑。

6、将鼠脑置于-4℃冰箱20min后，将其切成5等份冠状位切片，置于2%TTC溶液中，水浴、多聚甲醛液固定。用计算机病理图像分析仪及梯形法计算出梗塞灶体积，各脑片梗塞灶体积之和即为梗塞体积。左侧大脑半球梗塞灶区呈白色，主要为额顶部皮质和尾壳核，正常组织呈红色。部分组织表现为由白色向红色过度区。2.4HE染色再灌注24h，各组随机取5只大鼠，深麻后用生理盐水和多聚甲醛进行心脏灌流固定，断头取脑。在左侧大脑半球距离嗅球尖端7～11mm之间冠状切取约5mm厚脑组织块，固定、脱水、包埋成蜡块，连续切片，厚5μm，常规行HE染

7、色，观察病理形态学改变。2.5统计学方法数据处理采用SPSS11.5统计软件进行运算，结果以±s表示，组间差异显著性检验采用方差分析。3结果3.1PC对Caspase-3和Caspase-9活性的影响见表1。表1PC对脑缺血再灌注损伤大鼠Caspase-3、Caspase-9和脑梗塞体积的影响(略)假手术组Caspase-3和Caspase-9主要以无活性的酶原形式存在。缺血再灌注组Caspase-3和Caspase-9活性升高，与假手术组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。与缺血再灌注组比较，PC高、低剂量

8、治疗组的Caspase-3和Caspase-9活性明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)，高、低剂量组之间差异亦具有显著性（P0.05）。3.2PC对神经功能评分的影响见表2。表2PC对脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分的影响(略)假手术组无神经功能缺陷。与假手术组比较,缺血再灌注组神经功能评分明显增加(P＜0.05)，PC高、低剂量治疗组大鼠的神经功能评分低于缺血再灌