即时高压氧对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内caspase-3与caspase-9表达水平的影响

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4、se-3及caspase一9表达水平的影响刖吾脑血管病每年造成500万人死亡，成为世界上第二大死因。世界范围内，脑血管病不仅是最主要的死亡原因之一，而且，脑血管病有着很高的致残率，给社会和家庭带来沉重的负担。脑是人体最重要的器官，脑组织重量仅占体重的2％．3％，，但其需氧量却占全身供给量的20％．25％；脑组织中几乎无葡萄糖和氧的储备，因此脑组织对缺血缺氧耐受性极差。缺血脑组织血流再灌注后其缺血损伤反而进一步加重，是脑缺血性疾病共有的病理生理过程，影响患者的治疗和预后Il】，此过程导致大量神经元细胞死亡。细胞有两种死亡形式，即细胞坏死和细胞凋亡(apopt

5、osis)。细胞凋亡与细胞坏死的本质区别在于前者是一种主动的死亡过程，并伴随基因的转录和蛋白质的合成。缺血再灌注后0．5h可出现凋亡细胞，24"--48h达高峰，最长可持续至wJ28d。高压氧通过抑制兴奋性氨基酸的过度释放，减轻免疫炎症损伤，减少氧自由基的释放，保护血脑屏障的完整性，抑制神经细胞凋亡，减少一氧化氮的合成等方面保护缺血再灌注后的脑组织。一般来说触发凋亡信号转导途径可以分为外部死亡受体途径、线粒体途径和内质网途径。在这些途径中，Caspase家族蛋白酶充当了重要的角色。Le等【2】发现Caspase．3缺乏的大鼠缺血2h再灌注48h皮层梗死体积

6、减小55％，TUNEL阳性细胞密度减小36％，同样揭示了Caspase．3与脑缺血后神经元凋亡的关系。Caspase．9位于蛋白酶级联反应最上游，它是细胞线粒体依赖的凋亡途径中的重要起始因子。caspase．9首先活化，继而裂解caspase．3并使之激活，导致细胞凋亡【3J。本实验应用大鼠大脑中动脉(MCA)栓塞后再灌注造成局灶性脑缺血再灌注模型，以神经功能评分、caspase．3及caspase．9表达水平为观测指标，探讨即时6HBO对局灶性脑缺血再灌注损伤的影响。实验材料与方法一、实验动物与仪器选用本校动物实验部提供健康、鼠龄18．20周SD大鼠50

7、只，清洁级，雌雄不拘，体重230．270克。本实验采用烟台宏远GY3200型氧舱进行治疗。二、实验方法1、MCA．OR模型制备采用改良Zea—Longa线栓法‘41制备动物局灶性脑缺血模型：栓线选用直径0．26mm市售尼龙鱼线，剪成6cm长的线段，一端用细砂纸打磨光滑，酒精消毒后浸人生理盐水中备用。用10％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉大鼠(350ml／kg)，动物仰卧固定，于颈前正中切开皮肤，钝性分离皮下组织，游离右侧颈总动脉(CCA)及其颈内动脉0CA)幂I颈外动脉(ECA)，电凝ECA分支并结扎ECA。动脉夹夹闭CCA和ICA，在CCA距分叉处3mm处用4

8、．5号针头扎-d,孑L，将已备栓线插人CCA，穿过ICA与ECA分