苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的转移

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1、苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的转移作者：张平，贺兼斌，王小华，欧立文【摘要】目的研究苏拉明联合槲皮素对小鼠肺腺癌转移的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组：对照组、顺铂（DDP）组、槲皮素组、苏拉明组、苏拉明+槲皮素组。实验3周后，处死全部小鼠，取出双肺和剥离皮下肿瘤，计算肺转移发生率，计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率，测量各组小鼠肺湿重。免疫组化和图像分析系统检测皮下移植瘤中微血管密度（microvesseldensity，MVD）

2、，血管内皮生长因子（vascularendothelialgroinbinationainMiceKeyin;Quercetin;Angiogenesis;Lungadencarcinoma;Metastasis目前肺癌发病率和死亡率都有明显增高趋势，腺癌为其一主要组织学类型，癌瘤内血管丰富，局部侵润和血行转移发生较早。转移是恶性肿瘤的重要特征，也是主要死因。自Folkmam[1]首先提出实体瘤生长需要血管生成理论后，抗血管治疗肿瘤转移也成为了当前肿瘤生物治疗的研究热点之一。本实验利用LA795肺腺癌细胞

3、形成高转移T739小鼠皮下肿瘤转移动物复制模型[2]，应用具有血管生成抑制作用的苏拉明及槲皮素，以顺铂为对照，观察单独及联合用药对LA795肺腺癌肺转移的抑制作用，并探讨其作用机制。1材料和方法1.1实验动物、细胞株、药品及试剂T739雄性小鼠40只，鼠龄4～5周，均重20g左右，LA795肺腺癌荷瘤鼠两只，均由中国医学科学院肿瘤医院动物室提供（合格证号SCXK11000005），南华大学肿瘤研究所提供SPF级饲养环境。顺铂购于江苏豪森药业股份有限公司，苏拉明（Suramin）及槲皮素（Querceti

4、n）购于美国Sigma公司，VEGF兔抗鼠单抗购于美国SantaCruz生物科技公司，CD34免抗鼠一抗、广谱型SP试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物工程公司。1.2动物模型的建立处死两只荷瘤鼠，剥离瘤块，研磨成匀浆液，过360目钢网，生成肿瘤细胞悬液，镜下调节细胞浓度为2×106个/ml，于每只小鼠右后腿根部外侧皮下注射0.2ml瘤液，形成小鼠高转移性动物肿瘤模型。1.3分组及用药小鼠皮下移植处均成瘤，接种4d后随机分成5组，每组8只。(1)对照组:丙二醇0.2ml+生理盐水0.2ml/只腹腔注射（i

5、q），每天一次；(2)顺铂组:顺铂2mg/(kg·d)溶于生理盐水0.2ml中iq，于接种后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2ml/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素组:槲皮素50mg/(kg·d)溶于丙二醇0.2ml中iq，每天一次；(4)苏拉明组:苏拉明10mg/(kg·d)溶于生理盐水0.2ml中iq，每天一次；(5)槲皮素+苏拉明组:槲皮素及苏拉明按3、4组用药。1.4方法与观察指标1．4．1药物对肿瘤转移的影响肿瘤接种24d处死小鼠，剥离皮下肿瘤，剖胸观察双肺表面肿瘤转移情况，计数肺表面转移

6、结节数，肺表面结节转移抑制率=（1用药组平均转移结节数/对照组平均转移结节数）×100%,称肺湿重。肺及皮下肿瘤置入4%的中性甲醛固定，石蜡包埋，组织切片（4μm）行HE染色及免疫组化染色。1．4．2移植瘤内VEGF、MVD的表达采用免疫组化SP法检测，方法步骤严格按试剂盒说明书进行（皆1∶100稀释为工作液），用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。VEGF的判定标准，肿瘤细胞浆及胞膜呈棕黄色为阳性细胞，LuzexF图像分析系统测定肿瘤组织中VEGF平均灰度值(其灰度值越低，则VEGF表达水平越高，反之亦然

7、)，将每张切片在40倍镜下随机测10个视野，用平均灰度值评价染色强度。MVD判断标准参考WEidner等[3]方法。结果以±s表示。1．5统计处理根据数据类型分别使用组间t检验，χ2检验和相关分析，用SPSS10.0软件进行统计学处理。2结果2.1移植瘤的肺转移情况各组小鼠移植瘤的肺转移发生率、肺转移结节数、肺湿重等情况,见表1。表1各组小鼠移植瘤的肺转移情况3讨论已发生转移的中、晚期肺癌疗效差。肿瘤侵袭和转移是肿瘤治疗的一大难题。本文用有血管抑制作用的苏拉明联合槲皮素对肺腺癌的转移进行研究。结果显示，联合

8、组肺表面转移结节数比其他组明显减少，有差异显著性(P<0.05)，说明苏拉明和槲皮素联合应用有协同抑制转移作用。槲皮素组、DDP组及对照组小鼠均发生肺转移，差异无显著性（P＞0.05）；苏拉明组6/8小鼠发生肺转移，低于对照组，而联合组5/8小鼠发生肺转移与对照组比差异有显著性(P<0.05)，进一步显示联合用药协同作用。本实验苏拉明组及槲皮素组与对照组转移率相比无显著性差异，可能是本研究样本偏少，扩