槲皮素联合川芎嗪对小鼠lewis肺癌生长的抑制作用论文

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1、槲皮素联合川芎嗪对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用论文符慧群，李杰平，贺兼斌，张平【摘要】目的探讨槲皮素联合川芎嗪对小鼠Leechanismofquercetinbinationethylpyrazineongroainmice.MethodsTheLeamodelsofC57BLmiceicelydividedinto4groups:controlgroup(GroupA)，quercetingroup(GroupB)，tetramethylpyrazinegroup(GroupC)andquercetin+tetramethylpyrazinegr

2、oup(GroupD).Differenttreatmentsday2aftertransplantationandallmiceesoftumorseasurerespectivelyduringthetherapytime；subcutaneoustumorsination.Theexpressionofmicrovesseldensity(MVD),proliferatingcellnuclearantigen(PA)andvascularendothelialgromunhistochemicalmethod.Theapoptosisindex

3、(AI)easuredbybiotinyateddUTPnickandlabeling(TUNEL).Results（1）ThetumorgroorarkedlydecreasedinGroupB,CandDparedethylpyrazinecanremarkablyinhibitthegroainmice,anditsmechanismsmightberelativetoinhibitingtheangiogenesisandtumorproliferatingandinducingapoptosis.Keyethylpyrazine；Lea；V

4、ascularendothelialgrog/2ml，批号9803161）购于无锡市第七制药厂，丙二醇（分析纯）为重庆东方试剂厂生产，槲皮素购于美国Sigma公司，TUNEL凋亡检测试剂盒、兔抗鼠PA单抗及SABC免疫组化试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司，VEGF兔抗鼠单抗购于美国SantaCruz生物科技公司，CD34兔抗鼠一抗、DAB显色剂均购自福州迈新生物工程公司。1.2模型制备与分组给药取接种Lel）1∶3制备匀浆液备用。另取C57BL小鼠（购自中国医学科学院动物繁殖所）40只，雌雄各半，体重18～20g，每只小鼠于右腋皮下接种匀浆液，每只

5、0.2ml，建立小鼠皮下肿瘤动物模型。40只小鼠皮下移植处均成瘤，接种2d后随机分成4组，每组10只。对照组（A组）：予丙二醇0.2ml+生理盐水0.2ml腹腔注射，1次/d；槲皮素组（B组）：予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+生理盐水0.2ml腹腔注射，1次/d；川芎嗪组（C组）：予川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理盐水+丙二醇0.2ml腹腔注射，1次/d；槲皮素+川芎嗪组（D组）：予槲皮素50mg/kg溶于0.2ml丙二醇+川芎嗪100mg/kg溶于0.2ml生理盐水腹腔注射，1次/d。各组均连续给药20d，第22d处死全部小鼠进行

6、指标检测。1.3一般检测接种前和接种后每2d称1次体重，按体重变化调整给药。接种后每2d测量1次小鼠皮下肿瘤最长径（a）和最短径（b），计算肿瘤体积（V=a×b2/2），绘制肿瘤生长曲线。第22d脱颈椎处死小鼠，完整剥离肿瘤称重，计算抑瘤率，抑瘤率=（1-治疗组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%。1.4HE及免疫组化染色取肿瘤组织，10%中性甲醛固定、石蜡包理，5μm连续切片，HE染色，光镜观察。采用免疫组化SABC法检测血管内皮生长因子（VEGF）、增殖核抗原（PA）及肿瘤组织微血管密度（MVD）的表达，严格按照试剂盒说明书进行操作，阴性对照用

7、磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗。VEGF的判定标准：高倍镜下计数100个细胞，肿瘤细胞胞浆及胞膜中呈棕黄色阳性细胞10%为阴性，≥10%阳性，采用全自动图像分析系统测定肿瘤组织中VEGF的平均灰度值(灰度值越低，其蛋白质表达越高)。PA结果，以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞,选择阳性细胞密集区域，排除坏死区，每张切片计数10个高倍视野中阳性细胞数及细胞总数，计数增殖指数SPF。MVD的判定标准，凡与临近的肿瘤细胞、微血管或结缔组织分开的，呈棕黄色CD34染色的单个内皮细胞或内皮细胞串计为一个血管，但肌层较厚，或管腔面积8个红细胞直径的血管不计数。MV

8、D计数参考EKERKpathorangiogenesis:Revieorprognosis［