苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤 的转移论文

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1、苏拉明联合槲皮素抑制肺腺癌小鼠移植瘤的转移论文张平，贺兼斌，王小华，欧立文【摘要】目的研究苏拉明联合槲皮素对小鼠肺腺癌转移的抑制作用。方法将40只接种高转移性的LA795肺腺癌细胞T739小鼠随机分成5组：对照组、顺铂（DDP）组、槲皮素组、苏拉明组、苏拉明+槲皮素组。实验3周后，处死全部小鼠，取出双肺和剥离皮下肿瘤，计算肺转移发生率，计数各组小鼠肺表面转移结节数及算出肺表面结节转移抑制率.freelicrovesseldensity，MVD），血管内皮生长因子（vascularendothelialgroinbinationainMiceKeyi

2、n;Quercetin;Angiogenesis;Lungadencarcinoma;Metastasis目前肺癌发病率和死亡率都有明显增高趋势，腺癌为其一主要组织学类型，癌瘤内血管丰富，局部侵润和血行转移发生较早。转移是恶性肿瘤的重要特征，也是主要死因。自Folkmam1首先提出实体瘤生长需要血管生成理论后，抗血管治疗肿瘤转移也成为了当前肿瘤生物治疗的研究热点之一。本实验利用LA795肺腺癌细胞形成高转移T739小鼠皮下肿瘤转移动物复制模型2，应用具有血管生成抑制作用的苏拉明及槲皮素，以顺铂为对照，观察单独及联合用药对LA795肺腺癌肺转移的抑

3、制作用，并探讨其作用机制。1材料和方法1.1实验动物、细胞株、药品及试剂T739雄性小鼠40只，鼠龄4～5周，均重20g左右，LA795肺腺癌荷瘤鼠两只，均由中国医学科学院肿瘤医院动物室提供（合格证号SCXK11000005），南华大学肿瘤研究所提供SPF级饲养环境。顺铂购于江苏豪森药业股份有限公司，苏拉明（Suramin）及槲皮素（Quercetin）购于美国Sigma公司，VEGF兔抗鼠单抗购于美国SantaCruz生物科技公司，CD34免抗鼠一抗、广谱型SP试剂盒、DAB显色剂均购自福州迈新生物工程公司。1.2动物模型的建立处死两只荷瘤鼠

4、，剥离瘤块，研磨成匀浆液，过360目钢网，生成肿瘤细胞悬液，镜下调节细胞浓度为2×106个/ml，于每只小鼠右后腿根部外侧皮下注射0.2ml瘤液，形成小鼠高转移性动物肿瘤模型。1.3分组及用药小鼠皮下移植处均成瘤，接种4d后随机分成5组，每组8只。(1)对照组:丙二醇0.2ml+生理盐水0.2ml/只腹腔注射（iq），每天一次；(2)顺铂组:顺铂2mg/(kg·d)溶于生理盐水0.2ml中iq，于接种后第4、11、18d各一次，并予丙二醇0.2ml/只每天腹腔注射一次；(3)槲皮素组:槲皮素50mg/(kg·d)溶于丙二醇0.2ml中iq，每天一次

5、；(4)苏拉明组:苏拉明10mg/(kg·d)溶于生理盐水0.2ml中iq，每天一次；(5)槲皮素+苏拉明组:槲皮素及苏拉明按3、4组用药。1.4方法与观察指标1．4．1药物对肿瘤转移的影响肿瘤接种24d处死小鼠，剥离皮下肿瘤，剖胸观察双肺表面肿瘤转移情况，计数肺表面转移结节数，肺表面结节转移抑制率=（1用药组平均转移结节数/对照组平均转移结节数）×100%,称肺湿重。肺及皮下肿瘤置入4%的中性甲醛固定，石蜡包埋，组织切片（4μm）行HE染色及免疫组化染色。1．4．2移植瘤内VEGF、MVD的表达采用免疫组化SP法检测，方法步骤严格按试剂盒说明书

6、进行（皆1∶100稀释为工作液），用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。VEGF的判定标准，肿瘤细胞浆及胞膜呈棕黄色为阳性细胞，LuzexF图像分析系统测定肿瘤组织中VEGF平均灰度值(其灰度值越低，则VEGF表达水平越高，反之亦然)，将每张切片在40倍镜下随机测10个视野，用平均灰度值评价染色强度。MVD判断标准参考VD有一致性，说明苏拉明和槲皮素可抑制肿瘤内血管生成，切断肿瘤营养供应和肿瘤转移通道，抑制肿瘤的转移。我们同时观察到苏拉明与槲皮素联合能增强血管抑制作用，可能与槲皮素亦有抑制血管增殖的活性有关［7］，两者具有协同作用。结合VEGF表达灰

7、度值和肺表面转移结节数呈负相关(r=-0.88,P0.01)，提示VEGF是监测肿瘤转移的较好指标。苏拉明和槲皮素可通过下调这些蛋白质表达而抑制肿瘤转移，说明抑制血管生成为苏拉明和槲皮素抑制肿瘤转移的机制之一。综上所述，苏拉明和槲皮素对LA795肺腺癌的肺转移有抑制作用，联合应用有协同作用；它们抑制LA795肺腺癌转移与其抑制肿瘤内VEGF表达相关，其具体相关机制尚需进一步探讨。【