阿霉素对k562细胞gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究论文

《阿霉素对k562细胞gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究论文常伟孙汉英黄敏周剑锋张义成【摘要】本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RTPCR、流式细胞术检测Gfi1、Bcl2、bax基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、0.5、2.0mg/L作用K562细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自0.5增为2.0mg/L时,Gfi1

2、表达减少,bax表达增加;Bcl2表达在ADM0.5-2.0mg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异；当阿霉素浓度大于2.0mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论：一定浓度阿霉素能诱导K562细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系,阿霉素诱导K562细胞凋亡可能与抑制Gfi1基因的表达和激活bax基因的表达有一定的关系。【关键词】阿霉素K562细胞；细胞凋亡；Gfi1；Bcl2；baxEffectofAdriamycinonGfi1ExpressioninK562CellsandIt

3、sRelationshipycin(ADM)onK562cellsinvitroandthemechanismofexpressionchangesofrelevantapoptoticgenesandoncogeneGfi1.Theapoptosisetry(FCM)andtheDNAelectrophoresis;theexpressionchangesofGfi1、Bcl2、baxmRNAandproteing/LADMfor24hours,.freelg/L,theexpressionofGfi1decreasedandtheexpres

4、sionofbaxincreased;g/L,theexpressionofBcl2RNAandproteing/L,thepercentageofapoptoticK562cellsdecreasedechanismofapoptosisinK562cellsinducedbyADMmayberelatedtosuppressionofGfi1oncogeneandactivationofexpressionofbaxgene.Keyatol2007;15(2):278-282阿霉素（adriamycin,ADM）在细胞凋亡中起着重要的作用,国内外

5、有不少学者利用阿霉素成功地诱导了细胞凋亡，但对其作用机制还不完全清楚。为此,我们利用阿霉素诱导急性髓系白血病细胞株K562细胞凋亡,旨在了解阿霉素对细胞凋亡的作用机制,为今后临床血液系统肿瘤的治疗提供理论的依据。材料和方法试剂和细胞系K562细胞由我院免疫学教研室提供,胎牛血清为杭州四季青公司产品,阿霉素购自意大利Pharmacia公司（批号：215002）,RPMI1640购于美国Gibco公司,碘化丙锭(PI)购于北京中山生物工程公司。AnnexinV/PI试剂盒购自北京宝赛生物工程公司。RTPCR试剂盒购自华美公司。羊抗多克隆Gfi1、羊抗多

6、克隆Bcl2、鼠抗单克隆bax购自美国SantaCruz公司。兔抗羊及兔抗鼠FITC标记二抗购自北京中山生物工程公司。中国实验血液学杂志JExpHematol2007;15(2)阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因的研究细胞培养K562细胞培养于含有10%的胎牛血清的RPMI1640液中,在含5%CO2饱和湿度的培养箱中常规传代培养。每2天进行半量传代。取对数期生长细胞,调整K562细胞浓度至（2-5）×105/ml,接种于6孔的培养板,每孔加入2ml细胞液,然后分别加入阿霉素的终浓度为0,0.1,0.2,0.5,1.0,2.0及

7、5.0mg/L，每个浓度取3个平行孔。每次实验重复3次。DNA提取及电泳以0mg/L为对照组，0.5mg/L、2.0mg/L的阿霉素作用于K562细胞24小时后,收集细胞1×106,常规方法提取DNA,溶于200μl1×TE。取12μl样品1%琼脂糖凝胶电泳约50分钟,EB染色,紫外灯下观察并照相。细胞凋亡的FCM检测采用AnnexinVFITC/PI双染法FCM检测，方法参照试剂盒说明书进行。取上述终浓度处理细胞24小时,分别收集106以上的细胞于离心管中,用PBS充分洗涤,沉淀，加100μlbindingbuffer,重悬细胞，然后加入Annex

8、inV5μl和PI2μl,4℃避光30分钟;再加400μlbindingbuf