阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究

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1、阿霉素对K562细胞Gfi1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究作者：常伟　孙汉英　黄敏　周剑锋张义成【摘要】　　本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RTPCR、流式细胞术检测Gfi1、Bcl2、bax基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、、mg/L作用K56细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自增为mg/L时,Gfi1表达减少,bax表达增加;Bcl

2、2表达在ADMmg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异；当阿霉素浓度大于mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论：　一定浓度阿霉素能诱导K56细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系,阿霉素诱导K56细胞凋亡可能与抑制Gfi1基因的表达和激活bax基因的表达有一定的关系。【关键词】阿霉素　K56细胞；　细胞凋亡；　Gfi1；Bcl；　baxEffectofAdriamycinonGfi1ExpressioninK56CellsandItsRelationshipwiththeRelevantApoptot

3、icGenesAbstractThestudywaspurposedtoexploretheeffectofadriamycin(ADM)onK56cellsinvitroandthemechanismofexpressionchangesofrelevantapoptoticgenesandoncogeneGfi1.　Theapoptosiswasassayedbyflowcytometry(FCM)andtheDNAelectrophoresis;theexpressionchangesofGfi1、Bcl2、baxmRNAandprotEinweredetec

4、tedbyRTPCRandFCMafterK56cellsweretreatedwithdifferentconcentrationsofADMforhours.TheresultsshowedthatwhenK56cellsweretreatedwithmg/LADMforhours,thetypicalapoptoticDNAelectrophoresisbandofK56cellswereobservedwiththedoseincreasing.WhenconcentrationofADMwasmg/L,theexpressionofGfi1decreased

5、andtheexpressionofbaxincreased;whenconcentrationofADMwasmg/L,theexpressionofBclwasnotfoundtobesignificantlychanged,thelevelsofBclmRNAandprotEInwereofnostatisticaldifference.WhendoseofADMwashighermg/L,thepercentageofapoptoticK56cellsdecreasedwithcellnecrosis.Itisconcludedthatatcertainran

6、geofconcentration,apoptosisornecrosisofK56cellscanbeinducedbyADM,thepercentageofapoptosis,thechangesofexpressionofBcl2,baxandGfi1dependonthedoseofADM.ThemechanismofapoptosisinK56cellsinducedbyADMmayberelatedtosuppressionofGfi1oncogeneandactivationofexpressionofbaxgene.KeywordsADM;K562;

7、apoptosis;Gfi1;Bcl2;baxJExpHematol007;15(2):278-282阿霉素在细胞凋亡中起着重要的作用,国内外有不少学者利用阿霉素成功地诱导了细胞凋亡，但对其作用机制还不完全清楚。为此,我们利用阿霉素诱导急性髓系白血病细胞株K562细胞凋亡,旨在了解阿霉素对细胞凋亡的作用机制,为今后临床血液系统肿瘤的治疗提供理论的依据。材料和方法试剂和细胞系K562细胞由我院免疫学教研室提供,胎牛血清为杭州四季青公司产品,阿霉素购自意大利Pharmacia公司,RPMI1640购于美国Gibco公司,碘化丙