损毁帕金森病大鼠腹侧苍白球对纹状体内谷氨酸含量的影响论文

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1、损毁帕金森病大鼠腹侧苍白球对纹状体内谷氨酸含量的影响论文曾水林，李涛，杨鹏，康学军，萧静，黄晓，刘俊华【关键词】帕金森病Contentchangesofglutamicacidinstriatuminducedbylesionofventralpalliduminratsicacid(Glu)inthestriatumafterlesionofventralpallidum(VP)inParkinsonsdisease(PD)rats.METHODS:ThemodelofPDadebyinjecting6hydroxydopamine(6OHDA)intothelef

2、tsubstantianigraparspacta(SNc)andventraltegmentalarea(VTA)oftherats.AfterdamagingVPofthePDrats,byhighpressureliquidchromatography(HPLC)arkedly,andthecontentofGluinstriatum(μg/g)(3.0±0.4)al(2.2±0.7),model(1.3±0.2)andshamgroups(1.4±0.4)（P0.05）.Itreachedthepeakat2ndaybebeneficialforthetrea

3、tmentofPD.【Key;glutamicacid;rats【摘要】目的：观察腹侧苍白球(VP)损毁后帕金森病(PD)大鼠纹状体内谷氨酸(Glu)含量的变化.方法：应用6羟基多巴胺(6OHDA)制备偏侧PD大鼠模型，插入电极直流电毁损VP.freel,VP)治疗PD的效果及作用机制，为临床应用核团毁损术治疗PD提供理论依据.1材料和方法1.1材料健康SD大鼠60只，雌雄不拘，体质量200~300g.用4g/L戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，固定于江湾Ⅱ型脑立体定位仪，根据Paxinos等［1］脑立体定向图谱，按照文献［2］制备PD大鼠模型.选取平均转速在7圈

4、/min以上者，为合格PD模型大鼠，共计46只，分为3组.①VP毁损组(VP)28只，常规麻醉、消毒、固定于脑立体定位仪上，根据上述脑立体定向图谱，确定VP的坐标：前囟后0.4mm，中线旁开2.6mm，硬膜下8.0mm.钻开颅骨，暴露硬膜，以钨微电极（FHC,USA；尖端直径0.25mm，外套一自制的玻璃微电极，仅尖端暴露0.5mm，以保证毁损部位局限在靶区）插入左侧VP，用直流电凝固法毁损VP.毁损参数：电极接阳性，阴极接大鼠左后肢，电流1mA，通电时间15s，为保证大鼠在术中不出现肌肉抽动行为，可适当调整电流的大小.②假手术组(Sham)12只，只作麻醉、消毒、固

5、定于立体定位仪，在以上坐标位颅骨钻孔，VP处插入相同电极，但不进行直流电凝固法毁损.③模型对照组(Model)6只，不进行任何处理.④另取6只正常大鼠设为正常对照组(Normal).VP毁损组和假手术组的大鼠均于术后2mo内进行2～5次阿朴吗啡(apomorphine,APO)诱导的行为测试［2］.VP毁损组中凡旋转行为手术前后自身对照有明显改善的大鼠记为成功毁损大鼠，而旋转行为没有明显改善的弃用.经筛选符合要求的VP毁损大鼠共24只.1.2方法各组大鼠于行为测试完毕后，快速断头处死，冰皿上迅速分离纹状体，称质量，置液氮保存.检测时加入40g/L的高氯酸200μL制备

6、匀浆，定容至1mL后加入10g/L苯胺100μL,4℃低温离心12290g,.freelin，取上清液加丹酰氯(Sigma)衍生后加潘生丁(Sigma)内标，离心(4℃低温离心12290g,10min)，取上清液20μL用于高压液相色谱荧光检测谷氨酸（glutamicacid,Glu)含量.色谱条件：色谱仪(岛津LC10AD)，荧光检测器（岛津RF530），色谱柱为C18柱(北京康林科技有限公司，KromasilC18,250.0mm×4.6mm,5μm)，流动相：甲醇50mmol/L,醋酸钠50mmol/L,（1∶1，其中含四氢呋喃）；激发波长为360nm，发射波长

7、为500nm；流速1mL/min.检测工作电压为0.7V，检测灵敏度为20pg.经HE染色后，在光镜下对VP毁损组毁损区进行细胞形态学观察，同时判定毁损靶点是否准确.统计学处理：数据用x±s表示，所获数据采用SAS统计软件进行单因素方差分析，P＜0.05认为差异有统计学意义.2结果2.1VP毁损后对PD大鼠旋转行为的影响各组大鼠均于术后2mo内进行2～5次旋转行为测试，结果显示：第8周时，Model组为10.3±2.9，Sham组为9.6±1.3，VP毁损组为4.4±2.0.Model，Sham和VP毁损组在各自组内不同时间点比较差别无统计学意义；M