谷氨酸对大鼠纹状体神经元活动的影响论文

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1、谷氨酸对大鼠纹状体神经元活动的影响论文.freelicacid，GLU）及受体阻断剂MK-801对雄性大鼠纹状体（striatum，STR）神经元自发放电活动的影响。方法:应用微电泳方法记录纹状体神经元自发放电活动。结果:微电泳GLU使84.13%STR神经元自发放电频率加快。在43个STR神经元中直接微电泳MK-801可使62.79%STR神经元自发放电频率降低。在微电泳GLU产生兴奋效应的33个STR神经元中，微电泳GLU期间给予MK-801拮抗GLU的兴奋效应，可使90.91%已对GLU产生兴奋效应的STR神经元放电频率减慢。

2、结论:GLU对STR神经元起兴奋作用，但其兴奋作用可被MK-801所拮抗，当直接微电泳MK-801时，可使STR神经元产生抑制效应。研究提示抗谷氨酸作用的药物有抗帕金森病（Parkinsondisease.freela公司提供，乌拉坦、多聚甲醛由沈阳化工试剂厂提供。其它均为国产分析纯试剂。1.1.3实验仪器脑立体定位仪（西北光学仪器厂）;51217型微管拉制仪（美国STOELTING公司）;微电泳仪（中科院上海生理研究所）;SMUP生物信号处理系统（上海第一医科大学）;CM800冰冻切片机（日本Leica公司）;OLYMPUS光学显

3、微镜（日本产）。1.2实验方法1.2.1手术以20%乌拉坦（1ml/100g）腹腔麻醉后，将大鼠置于脑立体定位仪上行常规开颅术。1.2.2微电泳及细胞外记录根据PaxionsΩ）管内灌注含1%滂胺天蓝的3.0MNaCl溶液作为神经元放电活动的引导电极，外周管电阻为20～100MΩ，按需要分别灌注以下药物:GLU（1.0mol/l，pH8.0）、MK-801（0.01mol/l，pH4.0）、NaCl（3mol/l，pH7.0，对照）。借助微电极推进器将微电极缓慢插入纹状体，记录STR神经元自发放电情况。使用微电泳仪进行微电泳，电泳电

4、流为10～150nA，电泳时间为20s，滞流电流为5～10nA，可根据实验需要及神经元情况进行适当调节。除GLU外，其余皆用正电流泳入。分别观察GLU及MK-801对STR神经元放电活动的影响。再在微电泳GLU期间，给予MK-801，观察对STR神经元放电的影响。为了排除可能发生的电流作用，只要注入NaCl引起任何放电变化，该资料则不列入统计。神经元放电活动由微电极引导信号，经放大器放大、滤波、显示于示波器上，并输入SMUP生物信号处理系统，计数神经元放电情况，结果自动制成序列密度直方图。1.2.3组织学定位实验结束后，经中心管给予

5、20μA阴极直流电，经微电极电泳滂胺天蓝到记录部位，通电10～15min。对麻醉后实验动物开胸，经升主动脉首先用100ml生理盐水（37°C）快速冲洗血管后，继而用含4%多聚甲醛的0.1M磷酸缓冲液500ml灌流固定。开颅取出完整脑组织，做成长度为1.5cm的组织块，放入含4%多聚甲醛的磷酸固定液中固定（4°C，3h）;再将组织块移入含20%～30%蔗糖磷酸缓冲液中（pH=7.4，4°C），浸至其沉底。24h后，置于0.1M磷酸缓冲液中脱糖（3次，每次10min），后置于连续冰冻切片机内，-20°C，做连续冠状切片，切片厚30μm。

6、焦油紫染色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。光镜下进行组织学鉴定并拍照。1.2.4数据处理分别记录微电泳前后神经元放电频率，同时还记录微电泳后神经元兴奋或抑制的持续时间。微电泳药物后放电频率变化=（电泳药物期间放电频率-电泳前20s放电频率）/电泳前20s放电频率×100%。微电泳药物后放电变化超过±30%为有效临界值，进行统计分析。统计资料以均数±标准差（x±s）表示，进行t检验，比较显著性差异。以P0.05为差异显著性指标，P0.01为差异极显著性指标。2实验结果共观察了63个STR神经元。其中84.13%STR神经元在

7、微电泳GLU（20～80nA，20s）之后自发放电频率加快，平均放电频率由微电泳前的1.74±0.94Hz增加到3.31±1.63Hz，给药前后放电频率差异显著（P0.01）。GLU对STR神经元放电影响特点是作用明显、迅速，无潜伏期，无明显后作用，停止微电泳GLU后，放电迅速恢复到基础水平。另有11.11%STR神经元对GLU无反应，4.76%STR神经元微电泳GLU后表现为抑制作用。在43个STR神经元中直接微电泳受体阻断剂MK-801（40nA，20s），可使62.79%STR神经元自发放电频率降低，平均放电频率由微电泳前的2

8、.18±1.18Hz降低到1.53±1.20Hz，给药前后差异极显著（P0.01）。MK-801作用特点是作用缓慢而持久，有潜伏期（7.02±6.60s），且有明显的后作用，平均后作用时间为37.76±9.01s，电泳MK-801停止