超声波法碱水提取叶下珠黄酮的研究

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1、超声波法碱水提取叶下珠黄酮的研究作者：刘榕城，胡炜，邓光辉，罗兆学，黄树坚，崔连艳【摘要】　　目的研究超声波法碱水提取叶下珠黄酮的工艺。方法以pH、处理时间、料液比为主要考察因素，以浸取样品中总黄酮的含量为主要考察指标，确定最佳提取条件。结果最佳提取工艺为：Ca(OH)2的pH值为11，超声波提取时间为40min，料液比为1∶50。结论与传统的乙醇提取法进行对比显示，用超声波提取法具有快速、高效等特点。【关键词】超声波；叶下珠；黄酮Abstract：ObjectiveTodeterminetotalflavoneinPhyllanthusurinar

2、iaL.byVISSpectrophotometry.MethodsUsingthecontentofflavoneasindexes,theeffectsofpH,extractiontime,ents.ResultsTheoptimumconditionsin,ethodofultrasonicextractionhasahigherextractionrateandefficiencythantraditionalethanolextraction.　　Keyg，用乙醇溶解并稀释至250ml，作为芦丁标准液。精确量取1，2，3，4，5，6ml芦

3、丁标准液，分别置于25ml容量瓶中，各加水至6ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，混匀,放置6min，加10%硝酸铝溶液1ml，混匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以试剂空白作参比，用1cm比色皿在500nm波长处测定吸光度。所得数据经回归处理，回归方程为Y=10.231A+0.0053，r=0.9993。芦丁浓度在0.020～1.212mg/ml范围内具良好的线性关系。　　1.2.2叶下珠中总黄酮含量测定将干燥剪碎的叶下珠5.0g置于索氏提取器中，加入300ml乙醇索氏提取3h，将提取液过滤，残渣用乙醇洗涤3

4、次，合并滤液，定容于250ml，放置2h后，离心沉淀20min。取上层清液1ml按亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度，计算叶下珠中总黄酮含量为1.32%(即每100g叶下珠中含总黄酮1.32g)。　　1.2.3超声波碱水提取叶下珠中黄酮的方法称取5.0g剪碎的叶下珠于400ml烧杯中，按一定的料液比加入一定pH值的碱性Ca(OH)2溶液提取剂，浸泡24h，超声波提取一定时间后过滤，残渣用相应的提取剂洗涤3次，合并滤液，定容于250ml，放置2h后，离心沉淀20min，取上层清液1ml亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法测定吸光度，计算总黄酮提取率。　　2结果

5、　　2.1提取剂对黄酮提取率的影响常温下，料液比1/40，分别用乙醇、水、碱性水溶液（pH=11）浸泡24h，超声波处理30min，结果表明，用碱性水溶液有较高的提取率。对比了Ca(OH)2和其他碱性水溶液，因为植物中的果胶、黏液和酸性多糖等水溶性物质能与Ca(OH)2中钙离子生成难溶于水的沉淀被除去，对黄酮的提取能够收到较好的效果。所有采用碱性Ca(OH)2溶液作为提取剂。　　2.2pH值对黄酮提取率的影响常温下，料液比1/40，不同pH值条件下，超声波处理30min。结果见图1。从图1可知，在pH为11时，有较高的提取率。pH小于7，黄酮提取率较

6、低。pH大于13，黄酮的母体产生裂解，提取率也大幅度降低。　　2.3超声波处理时间对黄酮提取率的影响常温下，pH为11的碱水液，料液比1/40，搅拌条件下做不同超声波处理时间对黄酮提取率的影响实验。结果见图2。提取时间在20～40min之间提取率随时间的延长而提高，40min后逐渐趋于平衡。　　2.4超声波处理正交实验结果与最佳提取条件的确定为了获得以碱性Ca(OH)2溶液作为提取剂时，超声波提取叶下珠中黄酮的最佳工艺条件，利用正交法“均衡分散”的特点，以不同的pH，不同的处理时间，不同的料液比为主要考察因素，以浸取样品中总黄酮的提取率为主要考察指标

7、，确定最佳提取条件。表1正交因子水平（略）按表1的正交因子水平设计L9(34)正交实验，实验设计与结果见表2。表2正交实验方案及实验结果（略）　　从表2的正交实验数据及计算结果可知，极差值反映的因子影响顺序为A>C>B，pH对提取率影响最大，其次是料液比，超声波提取时间的影响最小。对于A因素有K3>K2>K1，对于B因素有K2=K3>K1，对于C因素有K3>K2>K1，由此可确定最佳条件为A3B2C3，即pH为11，料液比为1/50，超声波作用时间40min。按A3B2C3条件进行3次平行实验。结果见表3。表

8、3A3B2C3条件时超声波作用下黄酮提取率（略）由表3知：A3B2C3条件下黄酮提取率确实高于表2中每一项实