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时间:2018-11-19
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1、RPHPLC法测定愈伤灵胶囊中阿魏酸的含量论文赵海霞伟忠民杨菁王洪新宿希武【摘要】目的:建立RPHPLC法测定愈伤灵胶囊中阿魏酸含量的方法。方法:采用KromasilC18液相柱(200mm×4.6mm,5μm),乙腈0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相,检测波长为316nm,流速为0.9ml/min。结果:阿魏酸在0.01~0.16μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.5%;测得愈伤灵胶囊中含有阿魏酸的含量为66.8μg/颗。结论:该方法专属性强,重复性好,可用于
2、愈伤灵胶囊的质量控制。【关键词】愈伤灵胶囊;阿魏酸;RPHPLC法;含量测定愈伤灵胶囊由三七、红花、黄瓜子、土鳖虫、当归、续断、落新妇等7味药材组成。愈伤灵胶囊活血散瘀、消肿止痛.freel10A,日本岛津);色谱柱(Kromasil200×4.6mm,5μm瑞典);紫外检测器(ShimDAD,日本岛津);二元泵(ShimLC10ATVP,日本岛津);微量进样器(25μl,Hamilton美国);UVVis分光光度计(日本岛津);微量分析天平(MettlerAE163瑞士)等。阿魏酸对照品(中国药品
3、生物制品检定所,批号:0773200204);愈伤灵胶囊(锦州奥鸿药业有限责任公司提供,0.3g/颗,批号:20050603、20050615、20050626);乙腈(色谱纯,美国FISHER公司);二次蒸馏水;磷酸为分析纯。2方法和结果21色谱条件的选择选择Kromasil色谱柱为固定相,乙腈0.085%磷酸溶液(17:83)为流动相;取阿魏酸对照品流动相溶液于200~400nm波长范围内进行全波长扫描在316nm处有最大吸收,故选择316nm作为检测波长;流速为0.9ml/min,进样体积10
4、μl,理论塔板数(按阿魏酸计算)不小于5000。该条件下阿魏酸与其它组分均能达到基线分离,阴性对照样品在阿魏酸色谱峰的保留时间处无干扰。见图1。A:阴性样品B:愈伤灵胶囊C:阿魏酸对照品图1测定愈伤灵胶囊中阿魏酸含量的HPLC色谱图(略)22对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量,置于棕色量瓶中,加流动相使溶解并稀释至刻度后摇匀,避光低温保存,得到含阿魏酸40μg/ml对照品贮备液。23供试品溶液的制备取20颗愈伤灵胶囊,倾出药粉,研细,混匀,精密称取2.0g,置100ml具塞锥形瓶中,精密加入流动
5、相溶液50ml,称定重量,加热回流1小时并放冷,再称定重量,补足减失的重量,摇匀后静置,避光低温保存,取上清液过0.45μm微孔滤膜,取续滤液,得供试品溶液。24标准曲线绘制依次取阿魏酸对照品贮备液至10ml棕色容量瓶中,加流动相稀释至刻度,得浓度分别为1.0、2.0、4.0、8.0、16.0μg/ml阿魏酸对照品溶液。按2.1项下色谱条件依次进样10μl。记录峰面积,以阿魏酸峰面积(Y)对阿魏酸进样量(X)进行回归,得回归方程:Y=5283128X-3524.5(r=0.9999)。25精密度试验取
6、同一浓度对照品溶液,按2.1项下色谱条件连续进样6次,每次10μl,依法测定峰面积的RSD=1.35%(n=6),表明方法精密度较好。26重复性试验取同一供试品6份,分别精密称定,按2.3项下供试品溶液的制备方法配制溶液,按2.1项下色谱条件依法测定,每一样品测定3次。记录峰面积值,测定样品中阿魏酸的含量,样品中阿魏酸含量的RSD=1.94%(n=6),该方法重复性良好。27稳定性试验取同一供试品按2.3项下供试品溶液的制备方法配制溶液,避光放置,在24h内,按2.1项下色谱条件每隔4h进样,连续进样
7、6次,每次10μl,依法测定,阿魏酸峰面积的RSD=1.62%(n=6),表明供试液在避光条件下放置24h稳定性良好。28加样回收率试验准确称取已知阿魏酸含量的同一供试品1.0g,至100ml具塞锥形瓶中,分别加入2.2项下对照品贮备液(40μg/ml)4.5ml、5.5ml、6.5ml,加入流动相55.5ml、54.5ml、53.5ml按2.3项下供试品溶液的制备方法配制溶液,避光低温保存,按2.1项下色谱条件进样每次10μl,记录峰面积,测定阿魏酸的含量,平行操作2次,计算加样回收率为99.5%,R
8、SD为1.32%。见表1。表1回收率试验(略)29样品的含量测定取样品粉末2g,精密称定,按2.3项下供试品溶液的制备方法配制溶液,按2.1项下色谱条件依法测定,记录峰面积值,测定样品中阿魏酸的含量,结果如表2。由此得愈伤灵胶囊中阿魏酸的含量为66.8μg/颗。表2愈伤灵胶囊中阿魏酸的含量测定结果(略)3讨论阿魏酸含量测定方法主要有薄层色谱法、薄层洗脱比色法、毛细管电泳法、薄层扫描法、高效液相色谱法[3]等。本研究建立的测定
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