graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的研究论文

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1、Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的研究论文【摘要】为了研究Graves病伴血细胞减少症患者外周血淋巴细胞的变化，探讨Graves病伴血细胞减少症的发病机制，以流式细胞术测定24例患者外周血Th细胞亚群及CD5+B淋巴细胞的数量、B淋巴细胞胞浆内凋亡蛋白Bcl2的表达水平，并与18名正常人作对照。结果表明：正常对照组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是(0.39±0.24)%、（0.28±0.15）%、（0.52±0.12）%、（7.89

2、±0.38）%、（36.49±6.79)%；患者组Th1细胞和Th2细胞百分率、Th2/Th1比值、CD5+B细胞百分率、Bcl2表达率分别是(0.81±0.45)%、（6.83±3.02）%、（20.55±6.15）%、（20.89±1.62）%、（80.25±15.56)%，均显著多于正常人对照（P0.05,P0.01,P0.01,P0.05,P0.05）。结论：Graves病伴血细胞减少症发病可能与Th1/Th2比例失衡，Th2细胞增多，导致CD5+B细胞数量上升及凋亡减低，自身抗体的产生增加有关。【

3、关键词】Graves病;血细胞减少;淋巴细胞;免疫;细胞凋亡LymphocyteChangesinPatientsatocytopeniaAbstractTheaimofstudyphocytechangesinperipheralbloodofpatientsatocytopeniaandtoexploreitspathogenesis.ThequantityandratioofTh2、Th1、CD5+B、Bcl2levelin24Graves'sdiseasepatientsatocytopeniaal

4、controls.TheresultsindicaledthatthepercentagesofTh1,Th2,ratioofTh2/Th1,CD5+B,Bcl2leveinperipheralbloodofthepatientsalcontrols［(0.39±0.24)%(P0.05),(0.28±0.15)%(P0.01),(0.52±0.12)%(P0.01),(7.89±0.38)%(P0.05),(36.49±6.79)%(P0.05)］.Itisconcludedthatthepathogen

5、esisofGraves'sdiseaseatocytopeniamayberelatedtounbalanceofTh1/Th2,increaseofTh2inducingoverexpressionofCD5+BandBcl2onBcell.Keyatocytopenia;lymphocyte;immune;apoptosisGraves病由Parry于1825年首次报告.freela公司。流式细胞仪为BeckmanCoulter公司产品。外周血单个核细胞分离采集患者及正常对照者的外周血4ml,以5í

6、TA抗凝，800r/min离心10分钟，去上清，加入细胞培养液RPMI1640至4ml，混匀，用PBS等量稀释后分装于2个离心管中，用Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077)分离单个核细胞。细胞培养及细胞因子分泌抑制细胞按5×105/ml的浓度培养，并加入PMA和依若霉素以扩大原有细胞因子的产量，用莫能霉素抑制高尔基体对细胞因子的转运。基本培养基为IMDM，体系如下：10%胎牛血清、2mmol/L谷氨酰胺、50μg/ml青霉素、50μg/ml链霉素、50ng/mlPMA、250ng/ml依若霉素、140n

7、g/ml莫能霉素。细胞与培养液混合后加入到24孔板中，在37℃、95%湿度、5%CO2培养箱内培养5小时。荧光染色用结合异硫氢酸荧光素（FITC）的鼠抗人CD4单克隆抗体直接标记细胞膜CD4，用结合藻红蛋白荧光素的鼠抗人IFNγ、IL4单克隆抗体直接标记细胞浆内的IFNγ、IL4，Th1细胞为CD4+、IFNγ+，Th2细胞为CD4+、IL4+。CD19+CD5+细胞测定试管中加入鼠抗人CD19FITC和鼠抗人CD5PE各20μl,再加入单个核细胞悬液100μl，混匀，4℃避光孵育40分钟，P

8、BS液洗2遍，加入10g/L的多聚甲醛固定液200μl，混匀，4℃固定30分钟。对照管中加入鼠抗人CD19FITC和鼠抗人IgG1PE各20μl，按上述方法操作。最后用流式细胞术测定CD19+CD5+细胞，计算CD19+CD5+/CD19+的表达率。B淋巴细胞胞浆内Bcl2表达测定加入鼠抗人CD19FITC20μl,单个核细胞悬液100μl，4℃避光孵育30分钟，用PBS液洗2遍，加入1%的