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1、噬血细胞综合症患者外周血淋巴细胞活性分析浙江大学医学院附属儿童医院310000摘要：目的：噬血细胞综合征(hemophagocyticsyndrome,HPS),是一组组织细胞增生活化伴有吞噬血细胞现象的一类综合征，该病进展迅速，死亡率高，早期诊断、早期治疗对患者的治疗效果有很大的影响。木研宄为了解噬血细胞淋巴组织细胞增生症(hemophagocyticlymphohistiocytosis,HLH)患者外周血淋巴细胞的状态，明确在HPS发生过程中，外周血淋巴细胞增生及活化情况。方法：采用免疫荧光标记和流式细胞仪技术，对29例HPS患者外周血淋巴细胞亚群的
2、表面标记和T细胞活化后表面分子的表达进行分析，并以健康儿童外周血作为对照。结果：与对照组比较HPS患者CD4+细胞活化不明显，CD8+细胞明显活化。存活患者CD4+HLA-DR+表达较死亡患者明显偏低，CD8+CD25+细胞比例高。结论：HPS患者CD8+T细胞异常升高、活化，CD4+T细胞增牛.程度减低免疫反应失控在HPS发生中起重要作用。患者外周血淋巴细胞状态有助于了解HPS的发病机制、早期诊断和预后判断。关键词：噬血细胞综合征；淋巴细胞亚群；T淋巴细胞；活化噬血细胞淋巴组织细胞增生症(hemophagocyticlymphohistiocytosis
3、,HLH)乂称噬血细胞综合征(hemophagocyticsyndrome,HPS),是一组组织细胞增牛.活化伴有吞噬血细胞现象的一类综合征，以发热、肝脾肿大、全血细胞减少和组织细胞吞噬血细胞等为主要临床特征。无论是原发性或继发性HPS,其发生都是在相关诱发因素(主要为感染等)下，组织细胞(巨噬细胞及树突状细胞等)、NK细胞及细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)过度活化所导致的。目前认为其发病与免疫机制紊乱有关［1］。已有研究证明细胞因子在噬血细胞淋巴组织增生症的早期诊断、病情评估以及预后估计方面有重要作用，但外周血淋巴细胞状态改变及其意义目前尚无明确结论。木研
4、究旨在了解在HPS发生过程中，外周血淋巴细胞增生及活化情况及其在诊断及预后方面的意义。1.资料及方法1.1一般资料噬血细胞综合征患者29例为浙江大学医学院附属儿童医院2005年10月〜2009年6月住院患儿。男14例，女15例；年龄0〜10岁。诊断均符合HPS的诊断标准［2］，表现为①发热，②脾大，③血细胞减少（影响2或3系外周血细胞）（血红蛋白<90g/L,血小板<100×109/L,中性粒细胞<1.0×109/L）,④高三酰甘油血症和（或）低纤维蛋白原血症（禁食后三醜甘汕≥3.0mmoL/L,纤维蛋白原&
5、le;1.5g/L）,⑤骨髓、脾或淋巴结中发现噬血细胞现象而无恶变证据，⑥NK细胞活性减低或缺乏，⑦铁蛋A>1500g/L,⑧可溶性CD25（slL-2r）≥2400U/mL。符合上述8条中5条即可诊断。入选条件：1.完成临床评估诊断为HPS,并采集外周血标本行T细胞状态检查；2.采集标本前2周未使用过激素、化疗药物、免疫调节剂等影响外周血T细胞状态的药物；3.HPS初诊病人，包括幵始搜集资料吋仍在我院治疗的患者。对照组为非噬血细胞综合征儿童，近期无明显感染表现。T细胞亚群对照组为7例。男3例，女4例；年龄0〜8岁。活化T细胞对照组患者15例，
6、男性4例，女性11例，年龄为0〜13岁。1.2方法T淋巴细胞表型检测：确诊患者采取两组空腹外周静脉血2mL,肝素抗凝，采用免疫荧光双标记单克隆抗体和流式细胞仪技术，检验两组外周血单个核细胞中T细胞亚群表面标志及活化后T淋巴细胞表面分子的表达。于各测试管中加入100μl肝素抗凝，再分别标记单克隆抗体CD4/CD8、CD4/CD25、CD4/CD69、CD4/HLA-DR、CD8/CD25、CD8/CD69、CD8/HLA-DR室温孵育20min后Q-Prep系统溶解红细胞，2000r/min离心5min：除去上清液后以标准微球调整流式细胞仪，使变异系数
7、在2%以内，上机检测5000个细胞，荧光强度以对数放大，采用FACScaliburTM型流式细胞仪（BectonDickinson，SanJose,CA,USA）。1.3统计学处理数据残缺患者监测结果弃去，符合标准数据共28组。统计患者性别、年龄、临床表现等一般情况。分别比较患病组及对照组外周血T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞活化状态。按照治疗后患者死亡或存活分为2组，比较2组患者预后差异。分析患者外周血活化T淋巴细胞与细胞因子之间相互关系。采用SPSS17.0软件进行分析，数据以&plUSmn;S表示，组间比较用t检验，P<0.05为有显著性差异。1.结
8、果2.1患者情况共有29名患者加入本研究，其中男性14名（48.3
