海洋药物——海马酶解液活性的研究

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1、海洋药物——海马酶解液活性的研究刘琪，董美玲，张红，孔亮，李伟（大连海洋大学，辽宁大连116023）摘要：采用中性蛋白酶对海马粉进行酶解获得酶解液，并对酶解液的抗氧化活性、抑菌活性和抗疲劳活性进行了测定。实验结果表明，海马酶解液对DPPH的清除率为：雄海马45.2%，雌海马36%；清除羟自由基率为：雄海马81.7%，雌海马80.0%；超氧阴离子清除率为：雄海马46.0%，雌海马34.4%。海马酶解液同时具有抑菌活性，通过滤纸片法可以看出海马酶解液对大肠杆菌、产气杆菌和变形杆菌的抑制性比较强，而对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑制性较弱。海马酶解液还具有抗疲劳活性，通过小鼠负重游泳实验检测海马

2、中性蛋白酶酶解液的抗疲劳活性，实验组游泳时间平均为143min，而对照组的游泳时间为91min，相比之下实验组比对照组高出52min。进一步的研究结果还表明，海马酶解液具有增加小鼠游泳耐力、增加小鼠血清中SOD活力、降低血清中MDA和尿素以及降低血乳酸的作用。.jyqkpus）作为刺鱼目海龙科动物，还是一种具有较高经济价值的名贵中药，具有强身健体、补肾壮阳、舒筋活络、消炎止痛、镇静安神、止咳平喘等药用功能，在中药经典著作中均有记载，欧洲从18世纪就已经开始将海马入药。海马中含有丰富的氨基酸、蛋白质、微量元素及高碳多烯不饱和脂肪酸；具有抗癌作用、性激素样作用、抗疲劳作用和提高机体免疫力、提

3、高心肌细胞的收缩功能等，有待在食品、医药等方面进行研究开发[1]。目前，市场上有许多关于海马壮阳功效的产品，如泌阳春海马胶囊，实验表明具有明显提高机体性功能的药理作用[1]。但是关于海马的抗氧化活性和抗疲劳活性报道的较少，报道较多的是海马的性激素样作用，例如用5种海马的乙醇提取物，研究表明，灌服5种海马的乙醇提取物后，雄性小鼠的精子数和精子成活率增加，但对正常小鼠的性腺和性器官几乎无影响。本实验先利用中性蛋白酶对海马进行酶解，对海马酶解液进行抗氧化活性、抑菌活性和抗疲劳活性分别进行了测定。1实验部分1.1仪器与试剂1.1.1试剂与材料海马（克氏海马）为雌、雄海马，均购自大连美罗大药房；硫

4、酸铜、硫酸钾、浓硫酸、氢氧化钠、硼酸溶液、冰醋酸均为分析纯；中性蛋白酶（250g，BeijingSolarbio）；乙腈（色谱纯，百灵威科技有限公司)；N,N-二甲基甲酰胺（分析纯，天津博迪化工股份有限公司）。金黄色葡萄球菌（Staphylococcus），变形杆菌（BacteriumProteus），枯草杆菌（BacillusSubtilis），大肠杆菌(Escherichiacoli)，产气杆菌(clostridiumperfingens)均来自大连海洋大学食品工程学院微生物实验室；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒（生产批号20130406）、丙二醛（MDA）测定试剂盒（生产批号2

5、0130406）、尿素氮（BUN）测定试剂盒（生产批号20130410）、乳酸（LD）测定试剂盒（生产批号20130417）购于南京建成生物研究所。DPPH，浓H2SO4，Tris-HCl缓冲溶液，95%乙醇，水杨酸，盐酸，邻苯三酚，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，中性蛋白酶，胰蛋白酶酶解，牛肉膏，琼脂，无水乙醇，氯化钠，葡萄糖，盐酸，氢氧化钠等均为分析纯，20只昆明小鼠（清洁级，大连医科大学提供），PBS缓冲液，鼠粮，木屑，铅丝。缓冲溶液和实验室用水均用Milli-Q净化处理器制备。1.1.2仪器与设备Milli-Q超纯水净化仪（Millipore公司，美国）。高速多功能粉碎机（上海冰都有限公

6、司）。Pb-10型pH计（德国赛得利斯Sartorius）。TGL-16M高速台式冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司）。消化炉（BuchiDigestionUnitK-424），蒸馏仪（BuchiDistillationUnitK-350）。SP-752紫外分光光度计（上海光谱有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），YXQ-SG42-280手提式压力蒸汽灭菌锅，超净工作台（S——0.5N2摩尔质量，14.01g/moL；F——氮换算为蛋白质的系数（F=6.25）。1.3.2海马中灰分含量的测定分别准确称取雄海马粉末、碎屑各1g，雌海马粉末

7、、碎屑各1g于已知质量的坩埚中，经预处理后的海马置于调温电炉上以小火加热使试样充分碳化至无烟为止。将碳化好装有试样的坩埚用坩埚钳移至高温炉中，在（550±25）℃下灼烧4h，待高温炉炉温降至200℃以下后取出坩埚，冷却至室温。结果计算：海马中灰分的含量按下式计算：灰分式中：X——样品中总灰分的含量；m1——空坩埚的质量，g；m2——样品加空坩埚的质量，g；m3——残灰加空坩埚的质量，g。1.4海马酶解液的活性研究1.4.1海马酶解液