rnaⅲ抑制肽抑制葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的实验研究

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1、RNAⅢ抑制肽抑制葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的实验研究.L.编辑。作者：郝立波，邢庆昌，王继芳，王岩，卢世璧，张小斌【摘要】［目的］通过体外实验验证RNAⅢ抑制肽（RIP）能否抑制葡萄球菌在人工关节材料表面黏附，探讨其用于人工关节感染治疗的可行性。［方法］制作超高分子聚乙烯、钛合金和钴铬钼合金试样，葡萄球菌经FITC标记，人工关节材料试样消毒后接种FITC标记的葡萄球菌，每种试样4组，分别为空白组、RIP组、左氧沙星组和联合组，将含有细菌、试样和药物的24孔板在37℃下孵育30min后，用荧光显微镜观察。［结果］三种材料的用药组细菌光点计数（P＜0.001）和覆盖面积（P＜0.05）

2、均显著低于空白组；左氧组细菌光点计数少于RIP组，但两组的细菌覆盖面积无差别；联合组光点计数和细菌覆盖面积均少于左氧组和RIP组，差别显著（P＜0.01）。［结论］RIP可以抑制表皮葡萄球菌对关节假体材料表面的粘附，如果与抗生素联合应用可以起协同作用。【关键词】人工关节；感染；葡萄球菌；黏附；RNAⅢ抑制肽Abstract:［Objective］ToinvestigatetheinhibitingeffectsofRNAⅢinhibitingpeptide(RIP).Ontheadhesionabilityofstaphylococcusonjointimplantmaterialsur

3、face,determinethefeasibilityofRIPonpreventionandtreatmentofinfectionfromtotaljointreplacement.［Method］Staphylococcuscellsarkedonlyusedbiomaterials:Tialloy,CoCmoalloy,andUHMc的PBS菌液备用。1.3RIP合成有机化学固相Fmoc法合成RIP，由C端至N端合成，即将该多肽C端的第一个Fmoc-AA的羧基活化后与HMP树脂结合，再脱去Fmoc-保护基，与第二个羧基活化的Fmoc-AA结合，循环重复，直至合成肽树脂。然后用T

4、FA将合成的肽从肽树脂上切下，得到粗品肽。应用SO的生理盐水，RIP组每孔加入50μl含有浓度为lmg／mlRIP的0.75%DMSO溶液，左氧氟沙星组每孔加入50μl含100μg左氧氟沙星的水溶液，联合组用药剂量参照上述两组。将含有细菌和试样的24孔板在37℃下孵育30min，取出材料试样，PBS冲洗后，用荧光显微镜在400nm波段进行观察、拍照。1.5图像采集和数据处理在40倍物镜下用荧光显微镜拍照，采用imageproplus6.0软件对数字图像进行荧光光点计数和荧光覆盖面积比计算，结果为细菌数和细菌覆盖面积。获得的结果以均数±标准差(x-±s)表示。采用SPSS13.0软件进行t

5、检验，a=0.05为检验标准，P<0.05为差异有显著性。2结果三种材料的用药组细菌光点计数(P<0.001)和覆盖面积(P<0.05)均显著低于空白组；左氧组细菌光点计数少于RIP组，但两组的细菌覆盖面积并无差别；联合组光点计数和细菌覆盖面积均少于左氧组和RIP组，差别显著(P<0.01)(表1、2、3和图2、3、4)。表1RIP对表皮葡萄球菌在超高分子聚乙烯表面粘附的影响分组细菌对材料表面的粘附注：与空白组相比◆P<0.05，◆◆P<0.01，◆◆◆P<0.001；与RIP组相比●P<0.05，●●P<0.01；与左氧组相比P&

6、lt;0.05，P<0.01。(下同)表2RIP对表皮葡萄球菌在钛合金表面粘附的影响分组细菌对材料表面的粘附表3RIP对表皮葡萄球菌在钴铬钼合金表面粘附的影响分组细菌对材料表面的粘附3讨论生物被膜对人工关节置换术后感染可能起到如下影响：（1）生物被膜是引起关节置换感染的原因之一，多数关节置换术后感染是慢性感染，其始动环节是手术当中污染的细菌，这些细菌在假体表面黏附并形成生物被膜，被膜内细菌无法被杀灭，逐步发展成感染；（2）生物被膜增加了感染诊断的难度，生物被膜感染的细菌局限在被膜内，常规培养方法，如穿刺培养等很难采集到细菌；（3）生物被膜使感染治疗困难，尤其是人工关节感染，如不

7、取出假体并彻底清创，一般很难治愈。基于上述分析，作者认为，抑制细菌在假体表面形成生物被膜对预防和治疗人工关节置换术后感染具有价值。.L.编辑。细菌黏附在内植物表面是生物被膜形成的起始步骤，如果能够抑制细菌在假体表面的黏附，则可抑制生物被膜形成。但是目前抑制细菌黏附的方法不多，包括：（1）植入体内的假体必须非常洁净，在植入时才从包装内取出，最大限度减少细菌的黏附；（2）设计能够抵抗细菌黏附的内植物材料，如在内植物材料内加入银离子；（3