从噬菌体表面展示环状肽肽库中筛选葡萄球菌b型肠毒素抑制剂

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1、从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂作者：李韩平，周宏，郑玉玲，邓小红，马茹，姜永强【关键词】葡萄球菌B型肠毒素ScreeninginhibitorofStaphylococcalenterotoxinBfromrandomcircular7merpeptidelibrarydisplayedonphage【Abstract】AIM:ToobtainthespecificpeptidewhichcanbindwithSEBandinhibitSEBsenterotoxinactivitybypanningfromtherandomcircular7merpolyp

2、eptidelibraries.METHODS:TheaffinityofpeptideandthecompetitiveactivityofthesyntheticpeptidewiththatofantiSEBmonoclonalantibodyweredetectedrespectivelybyPhageELISAandcompetitionELISA.AnimalexperimentwasperformedtoassessthesuppressiveeffectofthescreenedpeptideonthetoxicityofSEBanditsenterotoxin.RES

3、ULTS:Thecircular7merpeptideobtainedbypanningsuppressedthemultiplicationofspleenlymphocytesinmice.Attheratioof160:1,thepeptideprotectedthelittlecatsfrom9/9attackofenterotoxinandthesurvivalrateofmicetreatedwiththescreenedpeptidewassignificantlyhighercomparedwiththatofthecontrolgroup.CONCLUSION:The

4、obtainedpeptidespecificallycombineswithSEBandsuppressesitsenterotoxinactivity,whichpavesthewayforthedevelopmentofSEBinhibitors.【Keywords】staphylococcalenterotoxinB;peptidelibrary;screening;inhibitor【摘要】目的：拟通过生物淘选从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选出与葡萄球菌B型肠毒素结合并能抑制该毒素毒性效应的特异性短肽.方法：采用PhageELISA来鉴定所得目的肽的亲和性；利用竞争ELIS

5、A研究合成肽与SEBmAb竞争结合SEB的情况；通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.结果：筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活；合成肽与SEB质量比160∶1下，合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性，并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结论：得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.【关键词】葡萄球菌B型肠毒素；肽库;筛选;抑制剂　0引言9/9　　　　葡萄球菌B型肠毒素［1］是超抗原家族的主要成员之一，该毒素可以造成食物中毒，严重时甚至导致致死性休克.SEB中毒后缺乏特异的治疗手段，因此研究SEB的特异高效

6、抑制剂具有重大的意义.我们利用固相筛选方法，即以SEB作为亲和靶标蛋白，从环状7mer肽噬菌体文库中筛选到与SEB结合，并能抑制该毒素毒性效应的噬菌体克隆.结果表明，所筛选环状7mer肽在细胞水平上可抑制SEB对小鼠脾细胞的激活，在整体动物水平上对SEB导致的毒性具有一定保护作用.1材料和方法材料环状7mer肽噬菌体文库为NewEnglandBioLabsInc产品;M13噬菌体单链DNA提取试剂盒为Qiagen公司产品；SEB单克隆抗体由本室保存;DGal为Sigma产品；抗M13噬菌体mAb、CMSepharoseFF为Amesham产品;BCA蛋白定量试剂为Pierce产品.乳猫

7、BALB/C实验动物由军事医学科学院丰台实验中心提供并饲养.方法随机肽库的扩增、定量按照所附试剂盒说明书进行；纯化按QIAprepM13Handbook进行.亲和靶标蛋白SEB的分离纯化与定量按文献［2］方法进行.9/9依据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应的多肽,由军事医学科学院六所合成,并进行了多肽纯化和脱盐处理,合成多肽的纯度达95%以上.将纯化的SEB与mol/LNaHCO3相混合,制成质量浓度为1g/L的溶液,取100μL混合液加于酶联条