医学毕业论文从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌b型肠毒素抑制剂

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1、从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂姓名：2014年6月25日从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂作者：李韩平，周宏，郑玉玲，邓小红，马茹，姜永强【关键词】葡萄球菌B型肠毒素ScreeninginhibitorofStaphylococcalenterotoxinBfromrandomcircular7merpeptidelibrarydisplayedonphage【Abstract】AIM:ToobtainthespecificpeptidewhichcanbindwithSEBandinhibitSEBsenterotox

2、inactivitybypanningfromtherandomcircular7merpolypeptidelibraries.METHODS:TheaffinityofpeptideandthecompetitiveactivityofthesyntheticpeptidewiththatofantiSEBmonoclonalantibody(McAb)weredetectedrespectivelybyPhageELISAandcompetitionELISA.Animalexperimentwasperformedtoassessthesuppressiveeff

3、ectofthescreenedpeptideonthetoxicityofSEBanditsenterotoxin.RESULTS:Thecircular7merpeptideobtainedbypanningsuppressedthemultiplicationofspleenlymphocytesinmice.Attheratioof160:1(SEB:synthetic7merspeptide),thepeptideprotectedthelittlecatsfromattackofenterotoxinandthesurvivalrateofmicetreate

4、dwiththescreenedpeptidewassignificantlyhighercomparedwiththatofthecontrolgroup.CONCLUSION:TheobtainedpeptidespecificallycombineswithSEBandsuppressesitsenterotoxinactivity，whichpavesthewayforthedevelopmentofSEBinhibitors.【Keywords】staphylococcalenterotoxinB;peptidelibrary;screening;inhibit

5、or【摘要】目的：拟通过生物淘选从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选出与葡萄球菌B型肠毒素(StaphylococcalcntcrotoxinB,SEB)结合并能抑制该毒素毒性效应的特异性短肽.方法：采用PhageELISA来鉴定所得0的肽的亲和性；利用竞争ELISA研究合成肽与SEBmAb竞争结合SEB的情况；通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.结果：筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活;合成肽与SEB质量比160:1下，合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性，并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结论：得到了能与SEB

6、特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.【关键词】葡萄球菌B型肠毒素；肽库;筛选;抑制剂0引言葡萄球菌B型肠毒素(StaphylococcalenterotoxinB,SEB)[1]是超抗原(SAg)家族的主要成员之一，该毒素可以造成食物中毒，严重时甚至导致致死性休克.SEB屮毒后缺乏特异的治疗手段，因此研宄SEB的特异高效抑制剂具有重大的意义.我们利用固相筛选方法，即以SEB作为亲和靶标蛋白，从环状7mer•肽噬菌体文库中筛选到与SEB结合，并能抑制该毒素毒性效应的噬菌体克隆.结果表明，所筛选环状7mer肽在细胞水平上可抑制SEB对小鼠脾细胞的激活，在整体动物

7、水平上对SEB导致的毒性具有一定保护作用.1材料和方法1.1材料环状7mer肽噬菌体文库(Randomcircular7merspeptidelibrarydisplayedonphage)为NewEnglandBioLabsInc产品;Ml3噬菌体单链DNA提取试剂盒为Qiagen公司产品；SEB单克隆抗体由木室保存；DGal(D半乳糖)为Sigma产晶;抗M13噬菌体mAb、CMSepharoseFF为Amesham产品；BCA蛋白定量试剂为Pierce产品.乳猫BALB/C实验动物由军事医学科学院丰台实验中心提供并饲养.