资源描述：
《从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌b型肠毒素抑制剂论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂论文李韩平，周宏，郑玉玲，邓小红，马茹，姜永强【关键词】葡萄球菌B型肠毒素ScreeninginhibitorofStaphylococcalenterotoxinBfromrandomcircular7merpeptidelibrarydisplayedonphage【Abstract】AIM:Toobtainthespecificpeptidetherandomcircular7merpolypeptidelibraries.METHOD
2、S:Theaffinityofpeptideandthepetitiveactivityofthesyntheticpeptideonoclonalantibody(McAb)alexperimentedtoassessthesuppressiveeffectofthescreenedpeptideonthetoxicityofSEBanditsenterotoxin.RESULTS:Thecircular7merpeptideobtainedbypanningsuppressedthemultip
3、licationofspleenlymphocytesinmice.Attheratioof160:1(SEB:synthetic7merspeptide),thepeptideprotectedthelittlecatsfromattackofenterotoxinandthesurvivalrateofmicetreatedentofSEBinhibitors.【KeyAb竞争结合SEB的情况；通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.结果：筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SE
4、B对鼠脾淋巴细胞的激活；合成肽与SEB质量比160∶1下，合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性，并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结论：得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.【关键词】葡萄球菌B型肠毒素；肽库;筛选;抑制剂0引言葡萄球菌B型肠毒素(StaphylococcalenterotoxinB,SEB)［1］是超抗原(SAg)家族的主要成员之一.freeler肽噬菌体文库中筛选到与SEB结合，并能抑制该毒素毒性效应的噬菌体克隆.结果表明，所筛选环状7me
5、r肽在细胞水平上可抑制SEB对小鼠脾细胞的激活，在整体动物水平上对SEB导致的毒性具有一定保护作用.1材料和方法1.1材料环状7mer肽噬菌体文库(Randomcircular7merspeptidelibrarydisplayedonphage)为Nea产品；抗M13噬菌体mAb、CMSepharoseFF为Amesham产品;BCA蛋白定量试剂为Pierce产品.乳猫BALB/C实验动物由军事医学科学院丰台实验中心提供并饲养.1.2方法随机肽库的扩增、定量按照所附试剂盒说明书进行；纯化按QIAp
6、repM13Handbook进行.亲和靶标蛋白SEB的分离纯化与定量按文献［2］方法进行.依据优势噬菌体阳性克隆序列合成相应的多肽,由军事医学科学院六所合成,并进行了多肽纯化和脱盐处理,合成多肽的纯度达95%以上.将纯化的SEB与0.1mol/LNaHCO3(pH8.6)相混合,制成质量浓度为1g/L的溶液,取100μL混合液加于酶联条微孔进行包板固定，于4℃过夜；次日弃包被液后，加200μL浓度为50g/LBSA于酶联孔中进行封闭，37℃结合2h,间隙振荡；弃封闭液，取100mL/LTBST液20
7、0μL洗涤6次,间隔为5min/次,然后将10μL肽库原液加于含有100μLTBST的酶联孔中,.freell/LTBST200μL洗涤10次,间隔为3min/次,最后加80μL洗脱缓冲液,室温轻柔吹打10min后,将洗脱得到的噬菌体转入微量离心管中,立即加入15μL1mol/LTrisHCL(pH9.1)进行中和.将所得噬菌体进行感染、扩增、纯化后进行下一轮筛选.在后续的筛选中TBST的浓度增为500mL/L.随机挑取第3轮噬菌体单克隆进行培养后进行PhageELISA分析及DNA序列测定.将SE
8、B包被酶联板，经30g/LBSA封闭后加入培养好的单克隆上清，采用PhageELISA法检测SEB与噬菌体的结合情况.ssDNA的提取按照QIAprepM13Handbook进行，纯化好的ssDNA送往上海博大基因公司进行序列测定.1.2.1活性测定①采用竞争抑制ELISA考察多肽与SEB的结合情况,SEB包被量为25μg.取100g/LmAb100μL,分别与噬菌体单克隆上清200,100,50,25,0μL，其中不足200μL的以8.5g/LNaCl补齐，然后加兔
