rnaⅲ抑制肽抑制葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的实验研究

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1、RNAⅢ抑制肽抑制葡萄球菌在人工关节材料表面粘附的实验研究作者：郝立波，邢庆昌，王继芳，王岩，卢世璧，张小斌【摘要】［目的］通过体外实验验证RNAⅢ抑制肽（RIP）能否抑制葡萄球菌在人工关节材料表面黏附，探讨其用于人工关节感染治疗的可行性。［方法］制作超高分子聚乙烯、钛合金和钴铬钼合金试样，葡萄球菌经FITC标记，人工关节材料试样消毒后接种FITC标记的葡萄球菌，每种试样4组，分别为空白组、RIP组、左氧沙星组和联合组，将含有细菌、试样和药物的24孔板在37℃下孵育30min后，用荧光显微镜观察。［结果］三种材料

2、的用药组细菌光点计数（P＜0.001）和覆盖面积（P＜0.05）均显著低于空白组；左氧组细菌光点计数少于RIP组，但两组的细菌覆盖面积无差别；联合组光点计数和细菌覆盖面积均少于左氧组和RIP组，差别显著（P＜0.01）。［结论］RIP可以抑制表皮葡萄球菌对关节假体材料表面的粘附，如果与抗生素联合应用可以起协同作用。【关键词】人工关节；感染；葡萄球菌；黏附；RNAⅢ抑制肽Abstract:［Objective］ToinvestigatetheinhibitingeffectsofRNAⅢinhibitingpept

3、ide(RIP).Ontheadhesionabilityofstaphylococcusonjointimplantmaterial11surface,determinethefeasibilityofRIPonpreventionandtreatmentofinfectionfromtotaljointreplacement.［Method］StaphylococcuscellsweremarkedwithFITC,andcultivatedtogetherwithcommonlyusedbiomateria

4、ls:Tialloy,CoCmoalloy,andUHMWPE.PhotosweretakentwithfluorescencemicroscopeandanalyzedwithPhotoshop9.0andImageproplus6.0softwaretostudytheadhesiondifferencebetweencontrol,RIP,Levofloxacin,andRIP+Levofloxacingroups.［Result］RIPsignificantlyreducedcelladhesiontot

5、hejointimplantmaterialsurface(PKeywords：totaljointarthroplasty;infection;staphylococcus;adhesion;RNAⅢ-inhibitingpeptide人工关节置换术后感染诊断治疗困难，主要原因是细菌在假体表面形成生物被膜，生物被膜保护细菌对抗不利的外界环境，阻止抗体、细胞和抗生素杀灭被膜内细菌，而且生物被膜不易被清除，导致感染迁延不愈和必须取出假体［1～3］。细菌黏附在假体表面是生物被膜形成的始动阶段，也是最重要的阶段，抑制细

6、菌的黏附则可以抑制生物被膜形成，对于预防和治疗关节置换术后感染具有重要意义［3］。细菌生物被膜形成过程受“群体感应信号(quorumsensing，QS)”11机制调节［4］。抑制这一细菌间的信号调节机制以抑制细菌的黏附、生物被膜形成和毒素分泌，进而预防和控制感染，是一条有别于抗生素的感染治疗新途径［5］。RNAIII抑制肽(RIP)是最近发现的葡萄球菌QS有效抑制剂，具有预防和治疗葡萄球菌感染的潜在价值［6、7］。本研究拟通过体外实验验证RIP能否抑制葡萄球菌在人工关节材料表面黏附，探讨其用于人工关节感染治疗的

7、可行性。1材料和方法1.1人工关节材料试样超高分子聚乙烯、钛合金和钴铬钼合金试样由北京力达康公司加工制作，直径10mm，厚度2mm，各24枚，表面抛光(图1)。1.2细菌标记表皮葡萄球菌ATCC35984源自NaomiBalaban，由上海复旦大学范长胜教授转赠。挑取单个菌落接种于50mlTSB培养基内，在37℃、150r/min培养箱中摇晃过夜。取20ml对数生长早期菌液，离心后从上清液收集细菌，悬浮于含10mgFITC、由1.5mlPBS和10.5ml碳酸氢钠(0.5mol/LpH9.5)组成的混合溶液中进行

8、FITC标记，大幅度搅拌菌液，4℃培养过夜。用0.511mol/L碳酸氢钠溶液将菌液离心洗涤3次，用比浊仪调配成0.5Mc的PBS菌液备用。1.3RIP合成有机化学固相Fmoc法合成RIP，由C端至N端合成，即将该多肽C端的第一个Fmoc-AA的羧基活化后与HMP树脂结合，再脱去Fmoc-保护基，与第二个羧基活化的Fmoc-AA结合，循环重复，直至合成肽树脂。然后用TFA