女贞子膜分离提取物对实验动物免疫功能影响研究

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1、女贞子膜分离提取物对实验动物免疫功能影响研究【摘要】目的：研究女贞子膜分离提取物对小鼠免疫作用的影响。方法：用陶瓷微滤膜分离女贞子水煎液药效部位，取膜分离所得过滤液作受试液，上清液作阳性对照；将小鼠分为5组，分别为2.5、5、10g/kg低、中、高3个剂量组和空白对照组、上清液对照组，小鼠连续灌胃30天后分别进行免疫指标测定。结果：各剂量组与空白组比较，中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应，明显增强小鼠碳廓清能力，明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力，明显升高小鼠血清溶血素含量，明显增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功

2、能；各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。结论：女贞子膜分离所得过滤液有提高实验动物免疫功能的作用，其提高免疫功能作用优于阳性对照上清液组。【关键词】女贞子；小鼠；免疫功能女贞子又名冬青子,系木樨科常绿乔木女贞（ligustrumucidumait）的干燥成熟果实，性味甘、微苦、凉，归肝、肾经，具有滋补肝肾，明目乌发的功能［1］。现代膜分离技术因高效、节能等优势，正日益在中药制剂中得到应用［2］，目前国内膜分离在中药制备的应用研究不多，同时由于陶瓷膜化学性质稳定、机械强度、耐高温、耐腐蚀等特点，在中药有效部位分离应用中充分展示了其独特的优点。本研究采用Al2O3陶瓷微滤膜对女贞子水

3、提液分离不同药效部位，通过吞噬细胞吞噬功能和小鼠血清溶血素等的测定，探讨其对小鼠免疫功能的影响，现报告如下。1材料与方法1.1动物材料NIH雌性小鼠，18～22g，由中山大学实验动物中心提供。动物合格证号：粤监证字2006A070。1.2受试物制备女贞子药材经鉴定符合《中华人民共和国药典》2005年版一部规定。定量粉碎女贞子成极细粉，第1次10倍量水，煎煮1.5h，第2次7倍量水，煎煮1h，合并煎煮液，微滤（滤材为无机陶瓷膜，孔径为0.2μm），得上清液和滤液，以滤液作为受试液，上清液作为阳性对照液。上述受试液和阳性对照液分别作为受试样品进行药效评价。1.3实验方法1.3.1剂量

4、分组每实验组包括空白对照组和阳性对照组、低、中、高剂量组（2.5、5、10g/kg），各剂量组实验动物数为10只。小鼠连续灌胃30天后开始试验。各实验组均按0.20ml/10g容量经口灌胃给予。1.3.2迟发型变态反应试验二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反应(DTH)。方法:用DNFB致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。(责任编辑：admin)1.3.3腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验制备20％的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠

5、板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min，育毕用生理盐水漂洗，晾干，以1:1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，计算吞噬率和吞噬指数。1.3.4小鼠碳粒廓清实验根据注入墨汁2min、10min后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。1.3.5NK细胞活性测定NK细胞活性测定采用乳酸脱氢酶（LDH）测定法。1.4统计方法采用统计软件包，用方差分析对数据进行处理。2实验结果2.1二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型变态反

6、应从表1可见，与阳性对照组比较，受试物中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应(P<0.05)。表1对小鼠细胞免疫功能影响注：*与阳性对照组比较。2.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验从表2可见，与阳性对照组比较，高剂量组均明显提高吞噬百分数、吞噬指数(P<0.05)。2.3碳粒廓清实验从表3可见，与阳性对照组比较，中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数(P<0.05)。2.4NK细胞活性测定从表4可见，与阳性对照组比较，各剂量组对NK细胞活性增强无显著性。表2对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响注：*与阳性对照组比较。表3对小鼠碳廓清功能的影响注：

7、*与阳性对照组比较。表4对小鼠NK细胞活性的影响3讨论采用陶瓷膜对女贞子水煎液进行处理，得含不同化学成分的药效部位，为明确药效部位的药效作用和进一步分离有效成分或部位，故开展上述药效实验对其筛选和评价。本研究结果证明,中、高剂量组能明显增强二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应，明显增强小鼠碳廓清能力能明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力，升高小鼠血清溶血素含量，增强抗体生成细胞能力；高剂量组能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能。它是一种免疫促进剂，对增强机体的抵抗能力