慢性粒细胞白血病微卫星不稳定性的检测及其意义论文

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1、慢性粒细胞白血病微卫星不稳定性的检测及其意义论文【关键词】染色体不稳定性;杂合性缺失;微卫星重复;白血病,.freelicrosatelliteinstability（MSI）ondiffer-entchromosomeandchronicmyeloidleukemia（CML）atdifferentstages.MethodsUsingmultiplex-PCR.freelicrosatellitelociofchromosome8，9and17inchronicmyeloidleukemiaonintheiniti

2、ationanddevelopmentofCML.MSIorLOHdetectedatdeferentlocishoightbeaneorsuppressorgenearoundthissiterelatingtotheepisodeofCML.［KEY　　慢性粒细胞白血病微卫星不稳定性的检测及其意义论文【关键词】染色体不稳定性;杂合性缺失;微卫星重复;白血病,.freelicrosatelliteinstability（MSI）ondiffer-entchromosomeandchronicmyeloidleukem

3、ia（CML）atdifferentstages.MethodsUsingmultiplex-PCR.freelicrosatellitelociofchromosome8，9and17inchronicmyeloidleukemiaonintheinitiationanddevelopmentofCML.MSIorLOHdetectedatdeferentlocishoightbeaneorsuppressorgenearoundthissiterelatingtotheepisodeofCML.［KEYS）是广泛存

4、在于原核及真核细胞基因组中的简单串联重复的DNA序列，约占人类基因组的10%［1］。由于微卫星DNA具有丰富的多态性、高度的杂合性以及较低的重组率等特点，已被广泛应用于人类基因组计划中的基因制图、遗传病诊断、法医学等各个领域。近年来，人们发现微卫星在恶性肿瘤及相关疾病中可表现出不稳定性（MSI）和杂合性缺失（LOH），因而对微卫星的监测成为寻找和定位抑癌基因、探讨肿瘤发生机制的一个重要方法［2，3］。慢性粒细胞白血病（CML）是一种造血干细胞起源的血液系统恶性肿瘤，其病程发展经历慢性期、加速期和急变期。对于慢性期转变为

5、加速期的机制尚未研究清楚。本文用多重PCR技术检测CML不同时期的多个微卫星位点的MSI和（或）LOH，以期探索其与CML发生及病情进展的关系。1对象与方法1.1对象CML病人37例，来自青岛大学医学院附属医院，包括慢性期（CP）27例，加速期和急变期（AP+BC）10例;男20例，女17例;年龄12～70岁，中位年龄47.1岁。诊断依据文献［4］标准。选择同期5例健康查体志愿者作为正常对照组。1.2方法1.2.1标本制备收集CML病人的骨髓标本，正常对照组外周血，同时刮取口腔黏膜标本做自身对照，参考本室常规方法分别提

6、取骨髓、外周血与口腔黏膜标本DNA备用。1.2.2引物合成选取与CML病人不同时期染色体改变密切相关的8、9、17号染色体上5个微卫星位点:D8S555、D8S559、D9S67、TP53A1/A2、AFMa127xg9，从基因库中查出其引物序列，由上海生物工程技术服务有限公司合成所需引物，引物序列见表1。表1第8、9、17号染色体5个微卫星位点引物序列（略）1.2.3PCR扩增将引物分成两组，用多重PCR方法同时扩增病人的骨髓（或正常对照组的外周血）和口腔黏膜DNA。1.2.4产物分析将扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳，

7、银染，用凝胶成像分析仪分析是否存在MSI和（或）LOH。1.3统计学处理用卡方检验（包括校正检验和精确检验法）。2结果2.1各期CML病人MSI和（或）LOH发生率比较27例CP病人中14例发生MSI和（或）LOH，10例AP+BC病人中8例发生了MSI和（或）LOH，二者比较，差异无显著性（P=0.152）。2.2不同微卫星位点MSI和（或）LOH的发生率及其比较在D8S555位点，CMLCP病人的MSI发生率为7.4%，AP+BC为40.0%，但未见LOH。进展期（AP+BC）病人的MSI发生率明显高于CP病人，差

8、异有显著性（P=0.009）。同时出现两个和两个以上位点改变者10例，其中CP病人6例，AP+BC病人4例，二者差异无显著性（P=0.407）。8号染色体的D8S555、D8S559位点MSI的发生率明显高于9、17号染色体的3个位点，差异均有显著意义（χ2=5.680、8.096，P0.05）。17号染色体的AFMa127xg9